Изучить клиническую эффективность препарата Sequel Seed Formula в лечении пациентов с иммунологическим мужским бесплодием. Шестьдесят пять пациентов с иммунологическим мужским бесплодием, т.е. с положительной реакцией на антиспермальные антитела и нарушением фермента акросомы, были разделены на группу таблеток Кирин (контрольная группа) и группу Формулы семян Ренджи (лечебная группа), из них 30 случаев в контрольной группе и 35 случаев в лечебной группе. Контрольная группа получала лечение таблетками «Кирин», а лечебная группа — «Формулой семян» в течение 3 месяцев. In the Qilin Pill group, there were significant improvements in sperm grade A, A+B and activity rate, anti-sperm antibody conversion rate with acrosomal enzyme activity before and after treatment (P<0.05), and in the Renjiu Seed Formula group, there were significant improvements in sperm grade A, A+B and activity rate, anti-sperm antibody conversion rate with acrosomal enzyme activity before and after treatment (P<0.05); in the Renjiu Seed Formula group, there were significant improvements in sperm grade A, A+B and activity rate, anti-sperm antibody conversion rate with acrosomal enzyme activity before and after treatment (P<0.05); in the Renjiu Seed Formula group, there were significant improvements in sperm grade A, A+B and activity rate before and after treatment (P<0.05). В группе "Формула семян Рендзю" показатели класса A, A+B и жизнеспособности, уровень конверсии антиспермальных антител, а также активность акросомального фермента улучшились значительно лучше, чем в группе "Таблетки Кирин" (P<0,05). Эффективность препарата в улучшении качества спермы, особенно в отношении скорости конверсии антиспермальных антител и активности акросомального фермента, заслуживает дальнейшего продвижения и применения в клинике. С марта 2011 г. по март 2012 г. в нашей больнице было проведено лечение 35 случаев мужского бесплодия с положительной реакцией на антиспермальные антитела и нарушением акросомального фермента с помощью препарата Sequence of Seeds Formula. До и после лечения проводились клинические наблюдения за показателями спермы класса А, класса А+В, жизнеспособности, скорости конверсии антиспермальных антител в отрицательные и активности акросомального фермента. 1 Клинические данные 1.1 Общая информация В период с марта 2011 по март 2012 г. в Научно-техническую больницу Гуанси поступило 65 пациентов, результаты представлены в следующей таблице. Все 65 пациентов - это пациенты с мужским бесплодием с положительными антиспермальными антителами и аномальной активностью фермента акросомы, которые посещали поликлинику отделения мужской медицины Первого филиала Гуансийского университета традиционной китайской медицины в период с марта 2011 по март 2012 г., из них 30 пациентов составили контрольную группу и 35 пациентов - лечебную группу. Возраст пациентов, принимавших таблетки Кирин (контрольная группа), составлял от 26 до 51 года, в среднем 31,55 года; длительность заболевания - от 1 до 4 лет, в среднем 1,55 года. Возраст пациентов, принимавших Sequel Seed Formula (группа лечения), составлял от 26 до 50 лет, в среднем 30,69 года; продолжительность заболевания - от 1 до 4 лет, в среднем 1,88 года. При статистическом анализе случаев в обеих группах по возрасту и длительности заболевания различия не были статистически значимыми (P>0,05) и были сопоставимы. 1.2 Диагностические критерии 1.2.1 Западные медицинские диагностические критерии Мужское бесплодие по данным ВОЗ[1]: сожительство более 1 года после заключения брака, объем спермы <2 мл, плотность сперматозоидов менее 20×106/мл, класс a+b <50%, сперматозоиды класса a <25%, жизнеспособность сперматозоидов <60%. Критерии включения: положительный тест с использованием набора для определения антител IgG к поверхности мембраны сперматозоида (реакция смешанной агглютинации), т.е. 10% и более активных сперматозоидов обволакивают сенсибилизированные микросферы (не имеет клинического значения, если связывание ограничивается хвостом). Любое лицо, отвечающее диагностическим критериям заболевания и имеющее значение акросомального фермента сперматозоидов <48,2 мкМЕ/106 сперматозоидов. 1.2.2 Диагностические критерии традиционной китайской медицины (ТКМ): недостаточность селезенки и почек, согласно Руководству по клиническим исследованиям новых китайских лекарственных средств Министерства здравоохранения КНР [2], основные симптомы: головокружение, шум в ушах, забывчивость и выпадение волос; боль и слабость в пояснице и коленях, орбитальная бледность глаз, расстройство кишечника, усталость, частая ноктурия, нарушение половой функции; язык бледный и толстый, или на языке имеются следы, пульс тонкий и слабый. 1.3 Критерии исключения: супруги страдают тяжелыми гинекологическими заболеваниями или у них диагностировано бесплодие; регулярная половая жизнь без контрацепции менее одного года или сопровождается эректильной дисфункцией и нарушением эякуляции; прием препаратов, подавляющих сперматогенез и жизнеспособность сперматозоидов, таких как противоэпилептические и противоопухолевые средства; атрофия яичек, врожденные аномалии, варикоцеле семенного канатика более Ⅱ степени; пациенты с сердечно-мозговыми, церебральными и сосудистыми заболеваниями, заболеваниями печени и почек, кроветворной системы. Тяжелые заболевания; пациенты с тяжелыми психическими заболеваниями; лица, не соответствующие критериям включения, не принимающие лекарственные препараты, имеющие неполные данные и т.д., влияющие на эффективность лечения; не соответствующие типу идентификации и типирования китайской медицины. 2 Методы лечения Программа приема препаратов: за 2 недели до начала и в период лечения в обеих группах больных прекратить прием других препаратов для лечения данного заболевания. Контрольная группа получала пероральный прием Kirin Pill (производство Guangdong Taiantang Pharmaceutical Co., Ltd, государственная фармацевтическая лицензия Z10930034) по 6 г 3 раза в день в течение 3 месяцев. Группа лечения принимала перорально Sequence Seed Formula (эмпирическая формула, основной лекарственный состав: Sichuan Sequence 20 г, Cuscuta sinensis 20 г, Lycium barbarum 20 г, Cortex Eucommiae 15 г, Boneset 15 г, Radix et Rhizoma Ginseng 30 г, Atractylodes Macrocephala 15 г, Poria 15 г, Coix lacryma 15 г, Huayishan 15 г, Jujube 15 г и т.д., с использованием частиц одноароматической формулы традиционной китайской медицины без отвара традиционных китайских лекарств, производства Jiangyin Tianjiang Pharmaceutical Company Limited города Цзяньиня провинции Цзянсу), 1 доза в день, с кипяченой водой около 200 мл. Ltd.), 1 доза в день, смешанная с кипяченой водой около 200 мл дважды утром и вечером перед едой. Показатели наблюдения: до и после лечения исследовались следующие показатели: (1) Количественный тест на акросомальный фермент сперматозоидов: реактив был приобретен в компании Shenzhen Huakang Biomedical Engineering Co. (2) Определение антиспермальных антител: до и после лечения использовали набор для определения антител IgG к поверхности мембраны сперматозоида (реакция смешанной агглютинации), реактив приобретен у Shenzhen Huakang Biomedical Engineering Company Limited (№ партии: YZB/State 0843-2008), работа проводилась в соответствии с инструкцией, результаты оценивали с помощью системы WLJY9000 Colourful Sperm Quality Detection System (Beijing Weili New Century Science and Technology Development Co. Ltd). Статистический анализ: использовался пакет статистических программ SPSS17.0. Для подсчета данных использовался тест x2, для измерения - t-тест или парный t-тест, анализ данных проводился с помощью ( ±s). 3 Результаты лечения: между контрольной и лечебной группами наблюдалась значительная разница (P<0. 05) по показателям a-класс, a+b-класс и жизнеспособность сперматозоидов до и после лечения. Таблица 1 Сравнение a-класс, a+b-класс и жизнеспособность сперматозоидов до и после лечения между двумя группами ( ±s) После лечения 35 27,83±6,03*△ 44,29±9,45*△ 57,38±10,82*△ Примечание: Сравнение показателей до и после лечения в данной группе, *P<0,05; сравнение с контрольной группой после лечения, △P<0,05. Сравнение скорости оборота антиспермальных антител до и после лечения между двумя группами, имеется достоверная разница (P<0,05), конкретные данные представлены в таблице 2. Таблица 2 Сравнение скорости превращения антиспермальных антител до и после лечения ( ±s) Группа Число случаев N Конверсия N Неэффективный Эффективный показатель Контрольная группа 30 18 12 60,0% Группа лечения 35 31 4 88,6% Примечание: F=7,11, P<0,05. Изменения активности акросомального фермента до и после лечения в группе лечения и контрольной группе были статистически значимы (P<0,05), результаты представлены в табл. 3: Таблица 3 Сравнение изменений активности акросомальных ферментов до и после лечения ( ±s) После лечения 35 48,31±10,21* △ Примечание: Сравнение с данной группой до и после лечения, *p<0,05; сравнение с контрольной группой после лечения, △p<0,05. Побочные реакции: За период наблюдения в группе лечения и контрольной группе побочных реакций не наблюдалось. 4 ОБСУЖДЕНИЕ Наличие антиспермальных антител на поверхности мембраны сперматозоидов и низкая активность акросомального фермента сперматозоидов является одной из важнейших причин мужского бесплодия, относящегося к категории иммунологического бесплодия, с чем связано и большинство многочисленных случаев необъяснимого бесплодия. Вследствие инфекций, травм, генетики, пороков развития репродуктивного тракта и т.д. может произойти утечка спермы, контакт с иммунной системой организма и собственная выработка антител. Антитела к сперме, антиспермальные антитела (AsAb) присутствуют примерно у 10% бесплодных мужчин, а их частота составляет около 3% в этиологии всех бесплодных пар. Сперматозоид как уникальный антиген и иммунная система организма после контакта с ним могут вызвать само- или гомологичную иммунную реакцию и выработать антиспермальные антитела. Однако в обычных условиях иммунная система организма не вырабатывает иммунный ответ на собственную сперму из-за наличия барьера кровь-тестис. Только при повреждении барьера кровь-тестис в результате воспаления репродуктивной системы, травмы или хирургического вмешательства растворимые антигены выходят наружу и фагоцитируются, вызывая иммунный ответ, который приводит к выработке антиспермальных антител. Положительные антиспермальные антитела могут приводить к агглютинации и торможению сперматозоидов, непосредственно влияя на их качество, что представляет собой аутоиммунитет сперматозоидов, возникающий внутри организма. Акросомальные ферменты являются одним из важнейших показателей качества спермы и фертильности. Низкая активность акросомальных ферментов может привести к бесплодию и повлиять на жизнеспособность сперматозоидов, кроме того, исследование акросомальных ферментов является определенной основой для проведения вспомогательной репродуктивной терапии. В клинической практике встречаются пациенты мужского пола, у которых рутинные анализы спермы в норме, но они не могут иметь детей, в этом случае исследование акросомальных ферментов становится еще более необходимым. Акросомальный фермент спермы существует в акросоме сперматозоида, является разновидностью трипсина, который синтезируется в виде зимогена и хранится в акросоме сперматозоида, являясь важным ферментом гидролиза белка в процессе оплодотворения. Когда в процессе реакции акросомы происходит связывание сперматозоида с яйцом, высвобождение акросомального зимогена создает условия для связывания сперматозоида с яйцом. Низкая активность акросомального фермента влияет на разрушение яйцевого бугра и способность сперматозоидов проникнуть в zona pellucida. Таким образом, позитивность антиспермальных антител и аномалии акросомального фермента являются одной из основных причин мужского бесплодия. Мужское бесплодие в китайской медицине называют "бездетностью". Согласно отечественной медицине, почки хранят сущность, главную репродуктивную, скрытую в почках сущность, относятся к невидимой сущности, являются сущностью воспроизводства (т.е. осязаемой сущностью, скрытой в семенной камере) материальной основы, почки хранят сущность, основное подразделение воспроизводства и роста и развития, почки полны сущности, тогда воспроизводство и рост функций энергичны; почки недостаточны, тогда сущность воспроизводства недостаточна. Почки - это основа врожденного, а селезенка - основа врожденного, обе они взаимодополняемы и взаимозависимы. Сущность почек зависит от выращивания и питания сущности воды и зерна, чтобы стать полной и зрелой, а селезенка и желудок трансформируют сущность воды и зерна с помощью тепла и согревания ян почек. Кроме того, селезенка является источником крови, а сущность и кровь могут трансформироваться друг в друга, и когда селезенка здорова и здорова, сущность почек может пополняться только за счет селезенки, чтобы поддерживать свою полноту и сущность деторождения. Поэтому в патогенезе подчеркивается важность "недостаточности селезенки и почек" в мужском бесплодии. Кроме того, "когда кровь обильна, сперма растет, а когда ци собирается, сперма наполняется". Иными словами, если селезенка слаба, а источник слаб, то сущность пяти органов меньше, а почка теряется, и трудно произвести сущность воспроизводства; если почка слаба, а ян-ци слаба, то селезенка теряет тепло, а транспорт и трансформация не справляются со своими обязанностями, что также может привести к недостатку крови и недостатку спермы и отсутствию воспроизводства. Для лечения мы решили использовать метод укрепления селезенки и почек в качестве руководства для формирования рецепта китайской медицины Sequence Seed Formula для лечения мужского бесплодия у пациентов с положительными антиспермальными антителами и аномальными пристеночными ферментами. В формуле используются следующие китайские препараты: Renjiu, Radix et Rhizoma Ginseng, который тонизирует почки и вырабатывает эссенцию, а также укрепляет селезенку; Cuscuta, Fructus Lycii, Atractylodes Macrocephala, который тонизирует селезенку и почки, вырабатывает и укрепляет эссенцию; Cortex Eucommiae, Fructus Poria, Coix Seed, который укрепляет селезенку, способствует жизненной энергии и вырабатывает эссенцию; Jujube, который входит в меридианы селезенки и желудка, используется для ликвидации желудка и пищи, чтобы помочь транспортировке и облегчить принятие пищи, которая используется как вспомогательное средство. Сочетание всех препаратов, теплых, но не сухих, тонизирующих, но не жирных, оказывают тонизирующее почки, селезенку и ци питающее кровь действие, воспроизводят сущность сперматозоидов. Современные фармакологические исследования подтвердили, что Sequel, Radix et Rhizoma Ginseng, Semen Cuscutae обладают антигипоксическим, антирадикальным действием, способствуют повышению жизнеспособности и подвижности сперматозоидов. Lycium barbarum уменьшает повреждение сперматогенных клеток, вызванное высокой температурой, и способствует нормальному развитию зародышевых клеток яичек. Atractylodes macrocephala и Cortex Eucommiae снижают содержание МДА и повреждение ДНК, тем самым достигается эффект антисвободнорадикального повреждения. В ходе исследования было установлено, что препарат Sequence of Seed Formula способен значительно улучшить качество спермы, по показателю конверсии антиспермальных антител в сперме общий показатель клинической эффективности достиг 88,6%, и в то же время способствует повышению значения акросомального фермента спермы у пациентов с мужским бесплодием, имеющих аномалию акросомального фермента. В период приема препарата большинство пациентов жаловались на увеличение физической силы и энергии, явных побочных реакций не наблюдалось, поэтому препарат обладает несомненной эффективностью и хорошей безопасностью и может быть в дальнейшем продвинут для использования в клинике.