Цитокин-индуцированные киллеры (CIK) — это новый класс цитокин-индуцированных киллерных клеток (CD3AK), полученный Schmidt-Wolf et al. в 1991 г. на основе CD3-активированных киллерных клеток (активированных анти-CD3 моноклональными антителами киллеров, CD3AK). CIK-клетки представляют собой гетерогенную группу клеток, полученных из мононуклеарных клеток периферической крови (МНК) человека in vitro после стимуляции различными цитокинами (IFN-γ, rIL-2, CD3McAb, IL-1α и др.), и обладают одновременно мощной противоопухолевой активностью Т-лимфоцитов и не-MHC-ограниченными опухолеуничтожающими свойствами NK-клеток. В настоящее время терапия CIK-клетками используется в клинических исследованиях многих видов опухолей, таких как рак почки, злокачественная меланома, рак толстой кишки, лимфома и т.д., и достигла определенных терапевтических эффектов. Исследования показали, что по сравнению с лимфокин-активированными киллерными клетками (LAK), опухолевыми инфильтративными лимфоцитами (TIL) и CD3AK-клетками, CIK-клетки обладают высокой скоростью пролиферации, высокой опухолеубивающей активностью и широким спектром уничтожения опухолей, Клетки CIK обладают такими преимуществами, как высокая скорость пролиферации, широкий опухолеубивающий спектр, одинаковая чувствительность к мультирезистентным опухолевым клеткам, низкая цитотоксичность к нормальным гемопоэтическим клеткам-предшественникам костного мозга, устойчивость к Fas-FasL-апоптозу эффекторных клеток, запускаемому опухолевыми клетками, а тяжесть заболевания и метастазы не влияют на противоопухолевую активность клеток CIK, поэтому клетки CIK имеют перспективу применения в релейной иммунотерапии опухолей. 1, индукция и биологические свойства CIK-клеток Эффекторные клетки CIK-клеток в нормальной периферической крови встречаются крайне редко — всего от 1% до 5%. В настоящее время существуют различные методы индукции КИК-клеток in vitro, основное отличие которых заключается в различных комбинациях цитокинов. CD3McAb и IFN-γ являются необходимыми компонентами, CD3 McAb играет роль митогена, который может сшиваться с CD3 на поверхности Т-клеток и индуцировать активацию клеток, а IFN-γ может индуцировать синтез цитокинов, таких как IL-1. В процессе культивирования клеток CIK порядок добавления факторов также оказывает определенное влияние на их токсичность, IFN-γ может повысить цитотоксическую активность CIK, только если его добавить за 24 ч до добавления IL-2 (если его добавить одновременно с IL-2 или позже его добавления, то он теряет усиление цитотоксичности), и этот эффект связан с ап-регуляцией рецептора IL-2 на поверхности клетки. Помимо выбора цитокинов, в культуре клеток CIK обычно используются следующие цитокины: IL-2, экзогенный фитогемагглютинин (PHA), IL-7, IL-12 и др. Клетки CIK представляют собой гетерогенную популяцию клеток, большая часть которых имеет маркеры Т-клеток (TCRα/β 86,5 ± 5,7%, TCRγ/δ 4,5 ± 2,6%, CD4 45,4 ± 3,2%, CD8 47,7 ± 11,0%), а часть — маркеры NK-клеток (CD16 10,4 ± 4,9%, CD56 28,5 ± 8,6%), причем 88% из них имеют маркеры NK-клеток (CD16 10,4 ± 4,9%, CD56 28,5 ± 8,6%). ), причем 88% CD56+ клеток коэкспрессируют CD3, и эта фракция CD3+CD56+ клеток оказалась основными эффекторными клетками в популяции CIK-клеток. CD3+CD56+ клетки составляли примерно 1-5% некультивируемых КМНС и могли значительно увеличиваться как в абсолютном, так и в относительном количестве после культивирования (30 сут экспансии, увеличение числа клеток в 100 раз и увеличение популяции в 10 раз). пропорция расширена в 10 раз), CD3+CD56+ клетки происходили в основном из Т-клеток (CD3+CD56-), а не из NK-клеток (CD3-CD56+) в PBMC, и далее было обнаружено, что экспрессия CD56 не происходит в CD4+CD8-клеточной субпопуляции Т-клеток во время культуры, тогда как в субпопуляции CD4-CD8+ ее было 1/4, в субпопуляции CD4+CD8+ — 1/3. субпопуляции было 1/3, а более половины CD4-CD8-субпопуляции демонстрировали экспрессию CD56. Поскольку соотношение двух субпопуляций — CD4+CD8+ и CD4-CD8- — в КМП было небольшим, субпопуляция CD4-CD8+ Т-клеток являлась основным источником эффекторных клеток CIK. Однако в расширенных CD3+CD56+-клетках экспрессия CD8 не влияла на их цитотоксические эффекты. Механизм действия CIK-клеток Принцип киллинга клеток-мишеней CIK до конца не выяснен, и возможные механизмы таковы: ① Прямой киллинг опухолевых клеток. Mehta et al. считают, что существует два пути уничтожения клеток-мишеней: во-первых, клетки CIK активируются распознающей структурой лимфоцитарного антигена-1 (lymphocyte function associated antigen-1, LFA-1), что приводит к цитоплазматическому токсическому частица-зависимому цитолизу, этот путь не связан с концентрацией циклического АМФ (cAMP) в цитоплазме; этот путь не связан с концентрацией циклического АМФ (cAMP) в цитоплазме. Этот путь не зависит от концентрации внутрицитоплазматического циклического аденозинмонофосфата (цАМФ); во-вторых, CD3-подобный рецептор на поверхности клеток CIK связывается с CD3-подобным рецептором и активирует клетки CIK на цитотоксический грануло-опосредованный цитолиз, который связан с уровнем внутрицитоплазматического цАМФ. ② Опухолесупрессивное и опухолеуничтожающее действие большого количества воспалительных цитокинов, образующихся после активации. В большом количестве экспериментов было доказано, что культивируемые КИК-клетки способны выделять разнообразные цитокины, такие как TNF-α, IL-2, GM-CSF, IFN-γ и т.д., которые не только оказывают прямое ингибирующее действие на опухолевые клетки, но и косвенно убивают их через регуляцию реактивности иммунной системы организма. ③Индукция апоптоза опухолевых клеток. Эксперименты Verneris et al. показывают, что клетки CIK, экспрессирующие FasL, в процессе культивирования могут противостоять Fas-FasL-апоптозу эффекторных клеток, запускаемому FasL+ опухолевыми клетками, и индуцировать апоптоз Fas+ опухолевых клеток, оказывая тем самым хроническое киллинговое действие на опухолевые клетки и обеспечивая длительное сохранение противоопухолевой активности. Sun et al. обнаружили, что клетки CIK вызывают гибель опухолевых клеток на ранней стадии и некроз опухолевых клеток на поздней стадии, снижая экспрессию p53, C-myc и Bcl-2 и повышая экспрессию Bax. ④ Способствуют пролиферации и активации Т-клеток. Ren Huan et al. пришли к выводу, что противоопухолевый эффект CIK-клеток in vivo может быть связан со стимулированием пролиферации и активации Т-клеток в организме хозяина. Также было высказано предположение, что примитивные CD3+ CD56+ Т-клетки после введения CIK трансформируются в цитотоксические Т-клетки (цитотоксические Т-лимфоциты (CTL)) с опухолеубивающей активностью под воздействием организма хозяина или стимуляции опухолевыми антигенами и играют противоопухолевую роль.