Гиперандрогенный синдром — это заболевание, обусловленное мутациями в числе, морфологии, структуре и сцеплении хромосом в период гестации вследствие воздействия вредных химических веществ, рентгеновского облучения, влияния факторов внешней среды, позднего гестационного возраста, кровосмесительных браков. Хромосомное исследование клеток амниотической жидкости имеет большое значение в пренатальной диагностике супероксидного синдрома. Принцип определения хромосомного анализа в культуре клеток амниотической жидкости: клетки амниотической жидкости — это клетки кожи плода, пищеварительного тракта, дыхательных путей и мочеполовой системы, около 95% которых являются мертвыми клетками, поэтому их необходимо культивировать, чтобы живые клетки достаточно размножались, для того чтобы собрать клетки для анализа кариотипа. Методика работы следующая: 1, взять 15-30 мл амниотической жидкости на 16-20 неделе беременности, центрифугировать при 1000 об/мл в течение 10 мин. 2, отбросить избыток супернатанта, оставить 1 мл амниотической жидкости и осажденные клетки, аккуратно разбить их в клеточную суспензию. 3, 3 мл питательной основы и 1 мл телячьей сыворотки помещают в инкубатор с температурой 37 ℃. 4, через 7 ~ 10 дней в культуре можно увидеть большое количество колоний фибробластоподобных или эпителиоидных клеток. В это время можно сменить свежую культуральную среду. 5.Для расширения в колонии клеток, и есть много полупрозрачных круглых делящихся клеток, вы можете добавить колхицин, так что конечная концентрация 0,1 ~ 0,3 мкг / мл, помещается в 37 ℃ инкубатор, а затем культивируется в течение 5 ~ 6 ч (выше процесс осуществляется в стерильных условиях). Критерии сбора: ① фибробласты как основной тип роста клеток в пятнах; ② наблюдать с помощью 10-кратного окуляра и 20-кратного объектива рост клеточных клонов, охватывающих 1 или более 1 полного поля зрения; ③ видеть более 10 полупрозрачных круглых клеток и более 10 двойных округлых ярко разделенных клеток. 6. Если рост клеток не является энергичным, цикл роста не выровнен или клетки стареют, не соответствуя стандарту сбора урожая, можно продолжить пассаж культуры в исходном флаконе. Метод: Сначала в асептических условиях слить культуральную среду, добавить несколько капель 2,5 г/л стерильного раствора трипсина, встряхнуть и слить. Добавьте еще 5-10 капель трипсина и осторожно встряхивайте в течение 5 мин при 37℃ для удаления прилипших клеток. Добавьте 4 мл свежей среды, содержащей телячью сыворотку, и инкубируйте при 37℃ в течение 4~5 ч. Затем осторожно замените культуральную среду и продолжайте инкубацию, как правило, урожай собирают через 3~5 дней после пассажа. 7, перенести культуральную среду в градуированную центрифужную пробирку, добавить 1 мл раствора ED-TA-трипсина в культуральную колбу и поместить ее в теплый бокс с температурой 37℃ на 5 мин, затем промыть прилипшие клетки локтевой пипеткой (для переваривания можно также использовать 2,5 г/л раствор трипсина). Отделившиеся от стенок флакона клетки выливали в центрифужную пробирку, смешивали с исходной культуральной средой, промывали флакон небольшим количеством теплого физраствора, промытые клетки также выливали в центрифужную пробирку и центрифугировали при 1000 об/мин в течение 10 мин. 8, супернатант аспирировали и отбрасывали, добавляли 3~5 мл предварительно подогретого 0,075 ммоль/л гипотонического раствора KCl и помещали при 37℃ на 10~15 мин. 9, предварительная фиксация, Фиксация и подготовка были такими же, как и при подготовке образцов хромосом клеток периферической крови. В норме общее число хромосом составляет 46; среди них 22 пары аутосом (порядковый номер от 1 до 22); половые хромосомы — XY у мужчин и XX у женщин; кариотип мужчины — 46, XY; кариотип женщины — 46, XX. Хромосомное исследование применимо при различных аномалиях хромосомного числа: например, синдроме Дауна (трисомия 21), трисомии 18, трисомии 13, трисомии 8, трисомии 22, врожденной трисомии, трисомии 3, врожденных хромосомах. Трисомия 8, трисомия 22, синдром врожденной гипоплазии яичек, синдром XXY, синдром Тернера, трисомия X и синдром Poly X.