Ревматоидный артрит является распространенным клиническим заболеванием. Автор считает, что основным патогенезом в китайской медицине в активной стадии РА является паралич суставов под воздействием сырости-жара и токсического зла, и клиническое применение Эрмяо Сань является эффективным. В данной работе мы использовали модель животных АА для наблюдения противовоспалительного эффекта различных составов препарата Эрмяо Сань, а также обосновали его клиническое применение и механизм действия в экспериментах на животных.
1. материалы и методы
1.1 Животные и группировка Девяносто самок 8-недельных крыс W istar, весом (150±20) г, класс SPF, были приобретены в Центре экспериментальных животных Шаньдунского университета традиционной китайской медицины, номер лицензии для животных: SCXK(LU)20111118. Группа Cangzhi 2 Huangbai 1, группа Cangzhi, группа Huangbai и комбинированная группа Huangbai Cangzhi с одним отваром, все получали равное количество дистиллированной воды и питались обычной пищей.
1.2 Препараты и реагенты Эрмяо сан состоял из Atractylodes cantonensis и Phellodendron cantonensis. Они были равномерно укомплектованы в препараторской нашей больницы и смешаны до концентрации сырого препарата 0,64 г/мл, 0,43 г/мл, 0,43 г/мл, 0,32 г/мл, 0,32 г/мл и 0,64 г/мл соответственно. Таблетки полисахарида Лейгонгтанг: произведены фармацевтической компанией Huangshi Feiyun Pharmaceutical Co., Ltd. с дозировкой 10 мг/таблетка. Экспериментальными реагентами являются полный адъювант Фрейнда, интерлейкин 1 (IL-1), интерлейкин 4 (IL-4), интерлейкин 6 (IL-6) и фактор некроза опухоли альфа (TNF-α).
2. Моделирование и применение лекарств
За исключением пустой группы, всем группам крыс вводили 0,1 мл полного адъюванта Фрейнда подкожно в правый задний палец ноги.
Суточная доза рассчитывалась в соответствии с концентрацией сырого препарата.
За исключением пустой группы, все крысы получали препарат через гаваж ежедневно до дня перед окончанием эксперимента, в общей сложности 22 дня.
3. предметы для экспериментального тестирования
(1) Измерение припухлости суставов В день формовки и каждые 3 дня после формовки толщина средней и задней 1/3 правой нижней конечности крыс измерялась штангенциркулем, причем у каждой крысы измерение проводилось дважды.
(2) Исследование образцов сыворотки крови В конце фазы введения препарата животных анестезировали 2% пентобарбиталом натрия путем внутрибрюшинной инъекции, и кровь брали из нижней полой вены путем рассечения, центрифугировали и получали сыворотку из наборов IL-1, IL-4, IL-6 и TNF-α и пробовали для анализа.
(3) Патологическое исследование суставов Из каждой группы было взято по две крысы, и обычные патологические срезы капсулы правого коленного сустава были отправлены на исследование.
4. результаты экспериментов
(1) Отек стопы и подошвы каждой группы крыс
В день введения формы у всех крыс в каждой группе наблюдался очевидный отек в месте инъекции на правой задней лапе и плантаре. После этого отек места инъекции у всех крыс достиг своего пика в течение 4-7 дней. Примерно через неделю у большинства крыс начал появляться отек в области левого коленного сустава. К двум неделям отек в области левого коленного сустава стабилизировался. По мере увеличения количества дней приема препарата у некоторых крыс припухлость левого колена уменьшалась в разной степени, а у очень небольшого количества крыс припухлость левого колена исчезла до того, как образец был разрезан. Подробные значения измерений при набухании и после дозирования представлены в таблице 1.
Таблица 1 Влияние на отек правой задней части стопы и плюсневой кости (мм)
Группа
Дни
Пустая группа
Модельная группа
Контрольная группа
Atractylodes macrocephala 1
Cyperus rotundus 1
Atractylodes macrocephala 1
Phellodendron 2
Atractylodis Macrocephala 2
Atractylodes flavus 1
Группа атрактилодесов
Группа Phellodendron
Комбинированная группа с одним отваром
0
3.93±0.27
4.09±0.40
3.85±0.46
4.07±0.58
4.29±0.31
4.43±0.32
4.32±0.16
4.08±0.49
4.36±0.59
1
3.96±0.30
7.38±0..40
7.45±0.46
7.26±0.39
7.29±0.52
7.62±0.47
7.60±0.55
7.57±0.27
7.35±0.15
4
4.02±0.46
7.99±0.65
8.22±0.54
8.02±0.57○
7.96±0.59○
8.15±0.67○
7.88±0.45○
7.74±0.52○
7.92±0.32○
7
3.94±0.33
7.90±0.39
8.31±0.24
7.95±0.55○
8.05±0.49○
8.21±0.67○
7.92±0.60○
7.83±0.48○
7.98±0.45○
10
3.92±0.40
7.87±0.40
8.26±0.30
7.68±0.45○
7.98±0.40○
8.12±0.56○
7..88±0.56○
7.75±0.48○
7.87±0.43○
13
3.95±0.41
7..78±0.42
8.12±0.33
7.49±0.42○
7.76±0.41○
7.98±0.45○
7.72±0.48○
7.62±0.34○
7.62±0.38○
16
3.93±0.35
7.69±0.38
7.98±0.42
7.26±0.35○
7.59±0.39○
7.82±0.40○
7.60±0.36○
7.58±0.43○
7.52±0.33○
19
3.95±0.40
7.60±0.41
7.82±0.35
7.02±0.45○
7.45±0.36○
7.69±0.30○
7.50±0.46○
7.49±0.37○
7.29±0.45○
22
3.94±0.35
7.56±0.42
7.70±0.42
6.80±0.36○
7.36±0.42○
7.59±0.46○
7.41±0.35○
7.38±0.42○
7.12±0.38○
Примечание: Анализ с помощью t-теста, P<0,05 для всех групп лекарств по сравнению с модельной группой и ○P<0,05 для группы китайской травяной медицины по сравнению с контрольной группой. Как видно из таблицы 1, отек стопы и подошвы крыс во всех группах постепенно уменьшался примерно на 2-й неделе после приема препаратов, что свидетельствует о том, что как китайские, так и западные препараты оказывали ингибирующее действие на воспаление стопы и подошвы крыс, а сравнение всех групп приема препаратов с модельной группой было статистически значимым (P<0,05). В то же время, была отмечена статистическая значимость (p<0,05) в сравнении между группами различных препаратов и группами одной травы Эрмяо Сан и контрольной группой. Также наблюдалась статистически значимая разница между группой эквивалентов китайских травяных лекарств и всеми остальными группами (p<0,05). Видно, что по степени облегчения припухлости суставов группа Cangzhu1Huangbai1 имела лучший эффект лечения. < span="">
(2) Влияние лекарств на воспалительные цитокины
Результаты влияния китайских и западных препаратов на воспалительные цитокины в сыворотке крови крыс подробно представлены в таблице 2.
Таблица 2 Влияние препаратов на воспалительные цитокины в сыворотке крови
Цитокины
Группа
IL-1β
ИЛ-4
ИЛ-6
TNF-α
Пустая группа
54.01±13.19
307.04±12.48
59.64±8.39
1.19±0.25
Модельная группа
112.55±10.54
41.36±4.15
68.31±6.72
1.95±0.05
Контрольная группа
85.90±13.89○
115.64±12.18
62.03±5.44
1.75±0.09
Atractylodis Macrocephalae 1 Huangbai 1
69.29±10.90○
170.40±10.76○
38.69±8.97□
1.23±0.12○
Atractylodes1Хуан Цай2
79.39±1229○
139.09±10.61○
49.60±5.02□
1.42±0.25○
Атрактилодес 2 Фелодендрон 1
76.64±15.89○
140.26±9.18○
45.88±8.43□
1.47±0.05○
Группа атрактилодесов
87.56±9.32
123.66±15.23
46.26±9.33□
1.60±0.38
Группа Cyperus rotundus
90.78±13.56
130.55±13.56
51.69±5.43
1.58±0.24
Комбинированная группа с одним отваром
86.34±12.75
125.36±15.33
56.59±4.29
1.56±0.08
Примечание: P<0,01 для всех групп препаратов по сравнению с модельной группой по результатам t-тестового анализа; ○P<0,05 и □P<0,01 для группы китайской травяной медицины по сравнению с контрольной группой.< span="">
Как видно из таблицы 2, IL-1β, IL-6 и TNF-α, которые могут отражать тяжесть воспаления, были самыми высокими в модельной группе, а IL-4, цитокин, отражающий торможение воспаления, был самым низким в модельной группе, и все они были статистически значимыми по сравнению с пустой группой (P<0,01). Влияние различных доз Эрмяо Сан на сывороточные цитокины было статистически значимым (p<0,01) по сравнению с модельной группой, а также статистически значимым (p<0,01) по сравнению с контрольной группой, включая il-1, il-4, tnf-α (p<0,05) и il-6 (p<0,01), полностью демонстрируя эффективность различных доз Эрмяо Сан по сравнению с контрольной группой. Группа < span="">Cangzhu 1 Huangbai 1 была статистически значимой (p<0,05) по сравнению со всеми другими группами препаратов, что указывает на то, что соотношение 1:1 оригинальной формулы Ermiao San было наиболее эффективным. < span="">
(3) Влияние лекарств на патологические участки суставов
Пустая группа: В полости иссеченного сустава было обнаружено небольшое количество волокнистой соединительной ткани и единичные хронические воспалительные клетки, а в капсуле сустава не было застойных явлений или отека.
В модельной группе в вырезанной полости сустава наблюдалась выраженная пролиферация фиброзной ткани и большая инфильтрация хронических воспалительных клеток, с выраженной грануляционной тканью и типичным образованием лимфоидных фолликулов. (см. рис. 1 для иллюстрации)
В каждой группе препаратов: патология в полости сустава была значительно изменена по сравнению с модельной группой. Гиперплазия фиброзной ткани была менее выраженной, чем в модельной группе, количество хронических воспалительных клеток было значительно меньше, а застойные явления и отек были значительно менее выраженными, чем в модельной группе. Различные группы Ermiao San были значительно лучше, чем контрольная группа, группа травяного отвара и группа мономерной смеси. Это указывает на то, что противовоспалительная эффективность различных групп препарата Эрмяо Сан была лучше, особенно лучшей была эффективность оригинальной формулы в соотношении 1:1. (См. рис. 2, 3 и 4 для иллюстрации)
Результаты показаны на: патологических срезах при световой микроскопии (как показано на рис. 1, 2, 3 и 4).
Рисунок 1 (модельная группа x 100) Рисунок 2 (контрольная группа x 100)
Рис. 3 (группа Atractylodes1Huangbao1×100) Рис. 4 (группа Atractylodes×100)
5. Обсуждение
РА относится к китайской медицине «тепловой паралич», «Dong bath wu jie объятия 1 Jing» животное рвотные Jing» о честно капает сомнительные Jing Jing кухня суд кроссовки (6) края в соответствии с энтузиазмом скандия кальция Jia ставка сомнительное содержание аммиака zai вилка путать с доской кубок стены курган любой гурманов ± барана [1].
Современная медицина установила, что IL-1 и TNF-α являются цитокинами, которые играют важную роль в патогенезе РА и могут привести к прогрессирующей деструкции суставов в дополнение к синовиальному воспалению [2]. Показано, что снижение уровня IL-1 и TNFα тесно связано с улучшением клинической активности (клинические и лабораторные показатели) [3]. Противовоспалительный эффект IL-4 проявляется, главным образом, в регуляции им активности многих различных типов клеток при РА, подавляя активность TNF-α, IL-1, IL-6 и IL-8, ингибируя синтез NO и продукцию PGE2, тем самым контролируя воспаление. Также известно, что использование этих клеток защищает целостность суставного хряща и подсуставной кости и других тканей сустава. Все чаще считается, что ингибирование активности воспалительных факторов TNF-α, IL-1, IL-6 и IL-8 на клеточном и молекулярном уровнях и повышение активности противовоспалительных факторов IL-4 и IL-10 может дать новые подсказки к стратегии лечения РА.
Секрет китайской медицины заключается в дозировке, и эффекты различных соотношений могут сильно отличаться. В этом исследовании мы обнаружили, что эффекты различных соотношений Ermusan отличались по величине, а соотношение 1:1 между Atractylodes macrocephala и Phellodendron chinensis было наиболее эффективным в уменьшении отека воспаленных пальцев ног крыс и в воздействии на воспалительные цитокины сыворотки крови.