Амниотическая мембрана уже много лет используется в качестве биоматериала в фундаментальных и клинических целях. В начале 20 века донорские трансплантаты из амниотической мембраны использовались при ожогах и язвенных ранах, затем в черепно-мозговой хирургии, абдоминальной хирургии, акушерстве и гинекологии и офтальмологии. С развитием биоинженерии и технологий тканевой инженерии использование амниотических мембран стало более распространенным, а исследования — более продвинутыми. 1, структура и функции амниотической мембраны Нормальная структура ткани амниотической мембраны человека подразделяется на слой эпителиальных клеток, подвальную мембрану, плотный слой, слой фибробластов и губчатый слой. Обычно подготовленная амниотическая мембрана содержит только эпителиальный слой, мембрану основания и плотный слой, а слой фиброзных клеток и губчатый слой удаляются во время подготовки. Эпителиальный слой содержит амниотические эпителиальные клетки и разнообразные факторы роста, секретируемые амниотическими эпителиальными клетками. 2. Характеристика амниотических мембран, приготовленных различными методами Существует три типа амниотических мембран, используемых в фундаментальных и клинических исследованиях: свежая амниотическая мембрана, замороженная амниотическая мембрана и амниотический внеклеточный матрикс, каждый из которых имеет свои характеристики[6]. 2.1 Свежая амниотическая мембрана Этот тип амниотической мембраны изготавливается путем промывания свежей амниотической мембраны в асептических условиях для удаления крови, отслаивания амниотической мембраны и хранения ее в холодильнике при 4°C для использования в течение 24 часов. Свежая амниотическая мембрана сохраняет эпителиальные клетки и цитокины амниотической мембраны и является полезной для восстановления глазной поверхности при использовании в лечении заболеваний глазной поверхности. Однако он обладает незначительной антигенной активностью из-за содержания клеток и имеет короткий срок хранения, что делает его неудобным в использовании. 2.2 Криоконсервация амниотической мембраны Свежеприготовленную амниотическую мембрану обезвоживали в 100% глицерине при 4°C и меняли раз в 24 часа в общей сложности 3 раза. Хранить в холодильнике при постоянной температуре 4°C. Обезвоженные амниотические мембраны были удалены и замочены в 100% растворе глицерина:DMEM (1:1), содержащем сульфат хондроитина, и хранились при -80°C в холодильнике при сверхнизкой температуре в течение 6 месяцев. Она может храниться в течение более длительного периода времени и более удобна в использовании, чем свежая амниотическая мембрана. 2.3 Внеклеточный матрикс был удален с амниотической мембраны после дегидратации глицерином, увлажнен в PBS, добавлен в 0125% трипсин, переварен при 37°C при комнатной температуре, затем оставшиеся амниотические эпителиальные клетки были удалены путем соскабливания клеточным скребком, под инвертированным фазово-контрастным микроскопом, после подтверждения отсутствия клеток, амниотическая мембрана была разложена на ацетатной пленке эпителиальной стороной вверх, добавлена в 100% раствор глицерина:DMEM, содержащий хондроитин сульфат (1:1). Их вымачивали в 100% растворе глицерина:DMEM, содержащем хондроитин сульфат (1:1), и хранили в холодильнике при 4°C в течение 1 недели или при -80°C в течение 6 месяцев при сверхнизкой температуре. Некоторые исследователи сшивали промытые физраствором амниотические мембраны с 012% глутаральдегидом, 015% додецилсульфатом натрия, 0125% трипсином, многократно промывали, замораживали, сушили, запаивали в отдельные упаковки и стерилизовали этиленоксидом [7]. Этот материал удаляет клеточные и растворимые белковые компоненты и сохраняет только нерастворимые компоненты исходной ткани, в основном включающие коллаген, эластин, аминоглюкан, структурные белки и т.д. Он может быть использован в качестве строительного леса для роста клеток и способствовать клеточной адгезии, в то же время имеет длительный срок хранения и прост в использовании.