Второй скрининговый тест обычно проводится в середине беременности, между 16 и 21 неделями беременности. Второй скрининговый тест является повторным тестом в случаях, когда первый скрининговый тест показал высокий риск или неясность. Тест измеряет концентрацию альфа-фетопротеина, хорионического гонадотропина и свободного эстриола в сыворотке крови матери, а также возраст женщины, неделю беременности, вес и дату родов, чтобы предсказать риск врожденных нарушений, таких как трисомия 21. Если риск высокий, то риск возникновения нарушения высок, в то время как при низком риске беременность можно продолжить. При скрининге высокого риска требуется дальнейшее неинвазивное исследование ДНК или амниоцентез для дальнейшего тестирования, чтобы предотвратить рождение плода с пороками развития. Это расстройство серьезно влияет на интеллект, и лечения от него нет, только пренатальный скрининг и пренатальная диагностика для его исключения.