В клинической практике SVF, содержащую ADSC, обычно получают путем липосакции живота или бедер, затем центрифугируют, переваривают, промывают и т.д. После этого ее смешивают с жировой тканью в определенной пропорции и пересаживают в реципиентную область. SVF также можно культивировать in vitro для получения ADSC, выращенных в стенке, а ADSC с хорошим ростовым статусом in vitro можно брать для композитной трансплантации с жировой тканью. Поскольку технология CAL стандартизирована и легко автоматизируется, в настоящее время имеется промышленное оборудование, что делает продвижение и применение этой технологии более удобным. I. Применение технологии SVF CAL (а) отсасывание жира Исследования показали, что подкожный жир живота и бедра человека наиболее богат АДСК. Поэтому при использовании технологии CAL эти две области часто выбираются в качестве донорской зоны жира. В стерильной операционной место липосакции обезболивается отечным раствором, после чего жир отсасывается через отсасывающую трубку диаметром 2,5-3 мм обычным способом. Смесь, отсасываемая трубкой для липосакции под отрицательным давлением, содержит компоненты раствора для набухания, жировую ткань, соединительную ткань, клетки крови и другие фрагменты тканей. (ii) Приготовление SVF Аспирированный жир делился на две части, одна из которых использовалась для извлечения SVF, а затем извлеченный SVF смешивался с другой частью жира, и эта смесь использовалась для трансплантации. Таким образом, процесс выделения SVF, содержащей ADSC, является критическим этапом в методике CAL. Весь процесс выделения обычно занимает 70-80 мин, и его суть заключается в следующем. 1.Центрифугирование Половина полученного при аспирации жира центрифугируется, в результате чего отделяются такие компоненты, как адипоциты, липиды и клетки крови. После центрифугирования смесь можно разделить на верхний, средний и нижний слои: верхний слой — в основном жир, содержащий триацилглицерин и частицы целия, который является продуктом жизнедеятельности жировых клеток после дробления; средний слой — в основном очищенный жир; нижний слой — клетки крови, плазма, фильтрат и т.д. В это время средний слой представляет собой очищенный жир. На данный момент средний слой представляет собой очищенную жировую ткань. Одна часть жировой ткани сохраняется для резерва, а другая отбирается для дальнейших действий по получению SVF. 2. Переваривание Жировая часть переваривается с равным количеством 0,075% стерильной коллагеназы при осцилляции (37℃, 30 мин). Отмывка Жировая часть и жидкая часть отделялись путем многократной промывки фосфат-буферсалином (PBS) или физиологическим раствором и центрифугирования. Жировую фракцию отбрасывали, а жидкую оставляли. Промывали PBS или физиологическим раствором и центрифугировали. Основная осязаемая клеточная фракция, полученная при центрифугировании, — SVF, представляющая собой смесь клеток, богатых ADSC, причем помимо ADSC в ней присутствуют также клетки кровяного происхождения, сосудистые эндотелиальные клетки и т.д. (iii) Образование комплекса жировая ткань-SVF Вторую половину жира, полученного в результате аспирации, смешивали с SVF, полученным в результате обработки, и оставляли на 15 мин, чтобы ADSC полностью адсорбировались на жире. Эти жиры напоминают активные биологические скаффолды и резервируются в качестве трансплантатов. Выделенные клетки должны быть строго проверены на количество и качество, также можно выделить небольшую порцию SVF для клеточной культуры, чтобы проверить активность клеток. (D) Трансплантация комплекса жировая ткань-SVF Трансплантация комплекса жировая ткань-SVF проводилась в соответствии с традиционными методами пересадки жира. Во-вторых, применение технологии ADSC CAL (1) Те же действия, что и выше, для выполнения аспирации жира, подготовки SVF. (2) Культура ADSC: инокулируйте смесь в контейнер для культивирования и культивируйте ее с помощью раствора для культивирования клеток, обычно используется культуральный раствор DMEM, содержащий 10% фетальной бычьей сыворотки. Меняйте раствор раз в 2-3 дня. Более крупные компоненты клеток крови, содержащиеся в SVF, могут быть удалены путем смены раствора, поскольку они не могут расти на стенке. Прилипшие к стенке клетки продолжают культивировать. После того как клетки вырастут до определенного количества, из них готовят суспензию, которую затем смешивают с аспирированной жировой тканью для применения. (3) Образование комплекса жировая ткань-АДСК: ресуспендируют жировую ткань, смешивают с ней суспензию клеток и оставляют на 15 мин, чтобы АДСК полностью адсорбировались на жире. (4) Трансплантация комплекса жировая ткань-АДСК: трансплантацию комплекса жировая ткань-СВФ проводили в соответствии с рутинной методикой трансплантации жира.