Заболеваемость раком шейки матки выше в развивающихся странах и отсталых регионах, при этом в Китае ежегодно регистрируется более 100 000 новых случаев, а во всем мире — около 500 000 новых случаев. Преходящие инфекции ВПЧ очень распространены, и большинство из них автоматически очищаются превосходным иммунитетом организма, в то время как риск развития цервикальной интраэпителиальной неоплазии и рака шейки матки после персистентной инфекции HR-HPV намного выше, чем в общей популяции. Риск развития цервикальной интраэпителиальной неоплазии и рака шейки матки после персистентной инфекции HR-HPV значительно выше, чем у населения в целом. I. Молекулярно-биологические характеристики ВПЧ ВПЧ представляет собой закрытый двухцепочечный эпителиофильный ДНК-вирус с геномом около 7,9 кб, молекулярной массой 5×106 дальтон, диаметром 50~55 нм и без оболочки, который по своей природе является нуклеиновым и может инфицировать различные участки кожи и слизистой оболочки человека, вызывая различные поражения, и подходит для жизни во влажной и теплой среде. ВПЧ состоит из области ранней фазы (Е-область), области поздней фазы (L-область) и длинной контрольной области (LCR). Исследования в области молекулярной биологии показывают, что в области Е (Е1, Е2, Е4-Е7) ВПЧ находятся основные онкогены — белки Е6 и Е7. E6 блокирует апоптоз путем ингибирования P53, а E7 может связываться с pRb для запуска клеточного цикла, что является важным молекулярным механизмом развития рака. Ядерная оболочка симметричная 20-гранная и состоит из 72 капсидов, которые состоят из двух основных капсидных белков, L1 и L2, кодируемых L-областью, из которых L1 составляет около 80% капсидных белков, является высоко консервативным и специфичным, имеет множество антигенных эпитопов, может вызывать нейтрализующие антитела у животных, часто используется в качестве целевого антигена для профилактических вакцин и является основным компонентом при разработке вакцин. L2 является минорным белком оболочки с меньшим содержанием и большей вариабельностью, и может вызывать перекрестную реактивность. Область LCR не обладает кодирующей способностью и содержит множество клеточных транскрипционных сайтов связывания, которые могут регулировать вирусную транскрипцию и репликацию. Характеристики генотипирования ВПЧ и механизм патогенности 1. Патогенность ВПЧ связана с его подтипами В настоящее время для цервикальной карциномы in situ и инвазивной карциномы выделено более 200 видов ВПЧ, в основном на основе гомологии ДНК области L1 в вирусном геноме как основы для классификации. Около 40 из этих подтипов могут инфицировать генитальный тракт. Классифицированы некоторые типы ВПЧ высокого риска с онкогенным потенциалом для развития рака шейки матки. Типы высокого риска, о которых сообщалось в предыдущей литературе, в основном все содержат 17 типов, включая 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 53, 56, 58, 59, 66, 68, 73, 82 и другие онкогенные генотипы, которые не классифицированы6, 11 и др. Некоторые генотипы не достигли консенсуса по классификации. Исследования показали, что инфицирование типами ВПЧ высокого риска может привести к развитию злокачественных опухолей репродуктивного тракта. При раке шейки матки чаще всего встречается персистирующая инфекция ВПЧ 16 и ВПЧ 18, причем ВПЧ 16 встречается особенно часто и имеет значительно более высокий риск возникновения поражений шейки матки, чем другие типы высокого риска. ВПЧ-18 — еще один распространенный тип ВПЧ высокого риска, который чаще встречается при аденокарциноме. Исследования, направленные на типы высокого риска, в настоящее время проводятся на типах ВПЧ низкого риска, ВПЧ-6 и ВПЧ-11, которые, как правило, не связаны со злокачественными поражениями и ассоциируются с подавляющим большинством анально-генитальных бородавок. Предыдущие исследования показали, что положительные типы ВПЧ высокого риска предполагают два состояния: высокий риск уже имеющихся CIN и рака шейки матки; повышенный риск CIN и рака шейки матки в ближайшие 10 лет, в то время как отрицательные прогностические значения ВПЧ предполагают пониженный риск рака шейки матки. 2. Генетические эпидемиологические данные о механизме канцерогенеза ВПЧ и предрасположенности к раку шейки матки Исследования в стране и за рубежом почти единодушно сходятся в том, что ВПЧ-инфекция не обязательно вызывает рак, а от заражения ВПЧ до возникновения рака шейки матки проходит 5-10 лет, в течение которых иммунитет организма укрепляется и у 80% инфицированных пациенток вирус может самостоятельно утихнуть, Особенно у молодых женщин, и риск заболевания в основном зависит от конкретных подтипов ВПЧ, и в этом процессе может произойти ряд переходов В этом процессе может произойти ряд переходов, и можно сказать, что рак шейки матки — это редкий неблагоприятный исход обычной инфекции. Считается, что вирус проникает в клетки базального слоя эпителия через микроразрезы в слизистой оболочке половых путей. Как только ВПЧ проникает в клетки базального слоя, вирусный капсид разрыхляется и циркулярная ДНК попадает в ядро, где реплицируется в ядре клетки-хозяина. Репликация вирусной свободной ДНК в базальных клетках относительно жестко регулируется, и эта репликация зависит от дифференцировки эпителиальных клеток. Доминантная инфекция возникает, когда инфицированные ВПЧ клетки начинают дифференцироваться и продвигаться вверх по эпителию, в этот момент вырабатывается большое количество копий гена ВПЧ, что зависит от дальнейшей дифференцировки эпителиальных клеток. Вирус начинает самоагрегироваться, завершает сборку в эпидермальных клетках и высвобождает интактные вирусные частицы, которые можно обнаружить на поверхности кожи, когда эпидермальные клетки отпадают. Количество ВПЧ-ДНК увеличивается с тяжестью поражения шейки матки и сопровождается повышением риска канцерогенеза с увеличением вирусной нагрузки. Клиническое тестирование ВПЧ и скрининг рака шейки матки Для улучшения ранней профилактики и лечения рака шейки матки крайне важно уделять внимание скринингу рака шейки матки и методам скрининга. В настоящее время наряду с широким развитием вторичной профилактики рака шейки матки появляются новые технологии скрининга. Существуют три доступных метода выявления, традиционный метод Пап-мазка (PapSmear), применение которого значительно сократилось и все еще используется в некоторых экономически менее развитых районах, и жидкостная цитология (ThinPreppaptest), разработанная в последние 10 лет или около того, оба метода имеют относительно высокую специфичность в скрининговой практике, однако из-за субъективного метода выявления невозможно избежать субъективного человеческого фактора, что ограничивает его развитие и продвижение. Ценность теста клинического типирования HR-HPV, который в настоящее время пользуется большим уважением на международном уровне, широко принят и включен в практику первичного скрининга рака шейки матки из-за его лучшей отрицательной предсказательной ценности, объективного экспериментального метода, относительно небольшого человеческого фактора и лучшей воспроизводимости, что может компенсировать вышеуказанные недостатки. США были первой страной, использовавшей ВПЧ-тестирование для скрининга рака шейки матки, и в 2003 году Управление по контролю за продуктами и лекарствами США (FDA) одобрило ВПЧ-DNAHC2 тестирование в сочетании с жидкостной цитологией для первичного и скринингового обследования на рак шейки матки у женщин старше 30 лет. В 2012 году Американское онкологическое общество ASC, Американское общество кольпоскопии и патологии шейки матки (ASCCP) и Американское общество клинической патологии (ASCP ) рекомендовали сочетание цитологии шейки матки и тестирования на ВПЧ высокого риска в качестве скрининга рака шейки матки в популяции женщин в возрасте от 30 до 65 лет для максимизации чувствительности скрининга рака шейки матки. В апреле 2014 года FDA впервые одобрило применение только ВПЧ-тестирования для скрининга рака шейки матки у женщин в возрасте 25 лет и старше — подход, который может напрямую повлиять на популярность цитологии в скрининге рака шейки матки, подчеркивая важность тестирования на ВПЧ высокого риска в скрининге рака шейки матки. На данном этапе в Китае широко используются два основных метода тестирования на HR-HPV, один из которых — более зрелый гибридизационный захват (HC2), широко используемый для количественного определения HR-HPVDNA; другой — определение типа ВПЧ по технологии генного чипа с использованием комбинации полимеразной цепной реакции (ПЦР) и обратной точечной гибридизации (RDB). Поскольку оба метода могут предоставить различную информацию о ВПЧ-инфекции в репродуктивном тракте субъекта соответственно, они более широко используются в скрининге и последующем наблюдении заболеваний шейки матки. 1. HC2 assay: Качественный анализ гибридизации нуклеиновых кислот ВПЧ in vitro, основанный на принципе усиления сигнала с использованием технологии захвата антител и флуоресцентного химического сигнала и геномных зондов. Этот метод позволяет определить общий уровень ДНК 13 типов ВПЧ высокого риска (16, 18, 31, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 68). Исследования комбинированного скрининга HR-HPVDNAHC2 с цитологией показали более высокое соответствие положительных результатов и точность комбинированного протокола с результатами патологического исследования, снижая частоту пропущенных диагнозов. 2. Тест на генотипирование ВПЧ: Принцип заключается в том, чтобы взять шейки матки эксфолиированных клеток, ПЦР in vitro амплификации ДНК клеток ткани, а затем использовать нуклеиновой кислоты папилломавируса человека амплификации типирования тест набор, используя нуклеиновой кислоты молекулярной быстрой гибридизации инструмент в качестве платформы, в соответствии с принципом импорта гибридизации, чтобы сделать целевой молекулы крест на мембране низкой плотности генного чипа, который был зафиксирован с нуклеиновой кислоты зондов для быстрой гибридизации. Факторы риска ВПЧ-инфекции Исследования показали, что распределение подтипов ВПЧ зависит от нескольких факторов и меняется в различных регионах, средах и популяциях, а такие формы поведения, как курение, возраст первого полового контакта и количество половых партнеров, являются важными факторами риска ВПЧ-инфекции. Кроме того, возраст, образование, профессия, экономический доход, методы контрацепции, количество беременностей, способ родоразрешения, количество родов и другие инфекции комбинированного репродуктивного тракта могут быть связаны с инфицированием ВПЧ. В последние годы фокус исследований ВПЧ сместился на взаимосвязь между возрастом и вирусной нагрузкой и тяжестью поражения шейки матки. Данные больших выборок эпидемиологических обследований показали, что у женщин в перименопаузе также выше распространенность ВПЧ-инфекции высокого риска.