ВПЧ еще не доступен для культивирования in vitro, чувствительность методов микроскопии окрашивания после среза ткани или мазка клеток относительно низка, а серологические методы, обычно используемые в клинической практике для выявления других патогенов, по результатам не являются надежными для диагностики ВПЧ-инфекции. Современные клинические способы прямого или косвенного выявления ВПЧ включают следующие: Во-первых, биопсия тканей, которая определяется по морфологическим изменениям клеток. Типичными изменениями являются эпидермальные клетки с перинуклеарными вакуолями и т.д. Дальнейшее иммуногистохимическое исследование также может быть проведено с высокой точностью, но практическое применение относительно скромное, поскольку это инвазивная операция и хлопотное получение материала. Второй метод — жидкостное цитологическое исследование (ЦЦТ), ЦЦТ также может в некоторой степени определить наличие ВПЧ-инфекции, хотя чувствительность низкая по сравнению с методами молекулярно-биологического обнаружения. В-третьих, для обнаружения ДНК ВПЧ используются технические средства молекулярной биологии, включая методы гибридизации нуклеиновых кислот, ПЦР и т.д. В зависимости от конкретного метода, ВПЧ может быть обнаружен количественно и типирован. Эти методы включают традиционные методы гибридизации, методы гибридизационного захвата, методы ПЦР и т.д. Ниже приводится краткое описание молекулярно-биологических методов. I. Традиционный метод гибридизации Высокая специфичность, интуитивность и другие преимущества, но сложная операция, более низкая чувствительность, чем метод ПЦР, и необходимость в свежих образцах тканей, не удобных для клинического продвижения. Во-вторых, метод гибридизационного захвата Метод гибридизационного захвата второго поколения HybridCaptureSystems (HC2) производства компании Digene — это метод жидкофазной гибридизации, который является единственной технологией обнаружения ДНК ВПЧ, одобренной Управлением по контролю за продуктами и лекарствами США, и может одновременно выявлять 13 типов вирусов высокого риска (HPVl6, 18, 31, 33, 35 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 68) и 5 типов вирусов низкого риска (6, 11, 42, 43, 44). Хотя CDC США одобрил тест HC2 для низкорисковых типов, существующие отечественные реагенты могут выявлять только высокорисковые типы. HC2 для выявления типов высокого риска более чувствителен и воспроизводим, но его недостатком является то, что он не может определить специфические подтипы ВПЧ, и тест стоит дорого, что затрудняет его продвижение в менее экономически развитых регионах. Кроме того, HC2 имеет определенные проблемы перекрестной гибридизации, что иногда может вызывать ложноположительные результаты. В настоящее время HC2-тест является важным и широко используемым методом в области клинического тестирования на ВПЧ высокого риска и предпочтительным методом для скрининга рака шейки матки. единым клиническим критерием определения HC2 является ≥1,0 пг/мл (эквивалентно 5000 вирусных копий/раз). Следует особо отметить, что отрицательный результат теста HC2 HPVDNA не означает полного отсутствия ВПЧ-инфекции, он лишь означает, что уровень ВПЧ в организме ниже 5000 копий на тест. При уровне вируса ниже этого значения вероятность развития цервикальной эпителиальной неоплазии CIN класса 2/3 в течение как минимум 3-5 лет очень низка. Другими словами, риск развития рака шейки матки очень низок. Если результат теста положительный, ДНК ВПЧ HC2 ≥ 1,0пг/мл (5000копий/мл), то регулярное обследование на HC2 должно проводиться ежегодно. Если результат теста положительный в течение двух лет подряд, следует проконсультироваться с врачом о следующем этапе обследования или лечения, а женщинам старше 30 лет необходимо более тщательное наблюдение. Мониторинг HC2 у пациенток после операции по поводу рака шейки матки может предсказать риск ухудшения состояния поражения или рецидива после операции. III. Метод ПЦР Тест на основе ПЦР в настоящее время считается лучшим методом для обнаружения и типирования ДНК ВПЧ и в основном делится на две части: амплификация гена и анализ продукта. Он может использоваться для качественного и полуколичественного тестирования ВПЧ, секвенирования ДНК и анализа мутаций. 1, амплификация генов ПЦР, включая общую праймерную ПЦР (GP-PCR), типоспецифическую ПЦР (TS-PCR) и количественную флуоресцентную ПЦР в реальном времени (RQ-PCR) и другие методы. 2, анализ продуктов ПЦР, включая метод генного чипа (также известного как ДНК-чип), анализ полиморфизма длины рестрикционного фрагмента (RFLP), метод секвенирования и метод гибридизационного анализа. Метод генного микрочипа может быть использован для типирования ВПЧ и диагностики смешанных инфекций, обладает такими характеристиками, как высокая пропускная способность, высокая чувствительность и специфичность, что может быть использовано для широкомасштабного скрининга и больше подходит для эпидемиологического расследования и исследования вакцин. Тестирование на ВПЧ у мужчин также важно, поскольку исследования показали, что мужчины с несколькими половыми партнерами являются «носителями» ВПЧ как высокого, так и низкого риска. Мужчины с ВПЧ высокого риска инфицированы в основном субклинически. В прошлом ВПЧ-инфекция у мужчин выявлялась с помощью пенильного лаважа или анализа спермы на ДНК ВПЧ, но при этом имелись такие недостатки, как трудности с получением материала, низкая чувствительность теста, сложные экспериментальные процедуры и отсутствие нормального контроля. В настоящее время не существует клинического метода выявления ВПЧ, который был бы одновременно типирующим и количественным, очень точным и недорогим. Чтобы решить эту проблему, приходится проводить различные тесты в соответствии с разными целями, и есть тенденция к комбинированию приложений, например, жидкостное цитологическое исследование (TCT) в сочетании с клеточным HC2 тестированием, или генный чип для скрининга с последующим полуколичественным HC2 тестированием. Кроме того, одновременное тестирование половых партнеров важно как при акромегалии, вызванной ВПЧ типов низкого риска, так и при таких заболеваниях, как рак шейки матки, вызванный ВПЧ типов высокого риска.