Недавно в Чунцине прошли 20-е академическое собрание отделения патологии Китайской медицинской ассоциации и 4-я ежегодная Китайская конференция по патологии. Во время встречи эксперты, включая профессора Чжао Юнь из Народной больницы Пекинского университета, профессора Го Хуэйцинь из Онкологической больницы Китайской академии медицинских наук и профессора Мэй Пин из Народной больницы провинции Гуандун, обсудили новейшие разработки CINtec PLUS (цитологический тест двойного окрашивания p16/Ki-67) и применение гистологического теста p16 в скрининге рака шейки матки для эффективного руководства клинической практикой. Одновременная экспрессия p16/Ki-67 предполагает дисрегуляцию клеточного цикла Постоянная инфекция вируса папилломы человека (ВПЧ) является одной из основных причин рака шейки матки. Обычно, если ВПЧ-инфекция не очищена, она становится постоянной и приводит к образованию вирусных онкогенных белков E6 и E7, которые могут связываться с белком-супрессором опухоли p53 и белком ретинобластомы pRb соответственно, инактивируя оба онкогена. Белок ВПЧ E6 обладает высоким сродством к p53 дикого типа, и связывание с p53 приводит к быстрой деградации p53, тем самым препятствуя клеточному ответу на повреждение ДНК и приводя к накоплению изменений генетических признаков и последующему генотипическому озлокачествлению. Белок ВПЧ E7 вмешивается в клеточный цикл, вызывая продолжение дифференцировки клеток и предраковые поражения, что приводит к неконтролируемой регуляции клеток, иммортализации и, если не лечить, прогрессии в рак. pRb, с которым белок E7 связывается преимущественно, нарушает функцию pRb, нарушает способность транскрипционного фактора E2F связываться и начинает процесс онкогенной трансформации, приводя к дерегулированному росту эпителиальных клеток, что приводит к развитию ряда в остальном нормальных клеточных пролифераций, включая белки Ki-67 и p16. Ген p16 — это гормонозависимый белок клеточного цикла. Ген p16 является типичным представителем ингибиторов клеточной циклин-зависимой киназы (CDK) и был связан с различными опухолями. Продукт гена ингибирует активность CDK4, отсюда и название p16INK4. Сверхэкспрессия p16 предполагает, что нормальные клетки находятся в фазе ареста клеточного цикла и что короткий период инфицирования ВПЧ не влияет на регуляцию клеточного цикла, в то время как персистирующий Аномальная пролиферация инфицированных ВПЧ клеток приводит к сверхэкспрессии p16, поэтому сверхэкспрессия p16 может быть использована в качестве маркера поражения шейки матки. Ki-67 — это ген ядерного антигена, который маркирует прогрессию клеточного цикла и пролиферативную фазу клеток, его экспрессия ограничена фазами G1, S, G2 и M цикла пролиферации клеток, и отсутствует в фазе G0. Обычно в физиологически нормальных клетках экспрессия p16 и Ki-67 антагонистичны друг другу и не встречаются вместе. Если p16 и Ki-67 сверхэкспрессируются одновременно, это указывает на инактивацию белка pRb и дисрегуляцию клеточного цикла. Поэтому одновременное обнаружение p16 и Ki-67 в одной и той же клетке может быть использовано в качестве маркера дисрегуляции клеточного цикла, которая связана с онкогенной трансформацией, индуцированной вирусами ВПЧ высокого риска, и может помочь обнаружить действительно больные клетки независимо от морфологических данных. Если тест на p16/Ki-67 положительный, то это свидетельствует о наличии высокосортных поражений и является объективным тестом, позволяющим отличить женщин с потенциально высокосортными поражениями. В июле 2012 года Коллегия американских патологов (CAP) и Американское общество кольпоскопии и цервикальной патологии (ASCCP) заявили, что p16 может использоваться в качестве маркера, отражающего ВПЧ E6/E7, влияющего на пролиферацию клеток, и что существует достаточно доказательств для рекомендации, связанной с низкосортными анально-генитальными сквамозными эпителиальными поражениями, рекомендуя использовать антитело p16INK4a с определенным номером клона (E6H4). в качестве биомаркера для определения того, влияет ли ВПЧ-инфекция на регуляцию клеточного цикла. Этот клон-номер является единственным в мире антителом p16INK4a, одобренным IVD. CINtec PLUS (p16/Ki-67 цитологический тест с двойным пятном) улучшает управление сортировкой скрининга рака шейки матки В настоящее время скрининг рака шейки матки в Китае сталкивается с такими проблемами, как низкая чувствительность цитологических тестов (50-70%), плохая воспроизводимость между наблюдателями, недостаточный контроль качества и нехватка технического персонала. Применение биомаркера p16/Ki-67 может эффективно улучшить сортировку цитологических тестов. Высокочувствительный и специфичный тест CINtec PLUS может использоваться для: отбора атипичных сквамозных эпителиальных клеток без определенного значения (ASC-US) (особенно у молодых женщин); отбора низкосортных сквамозных интраэпителиальных поражений (LSIL); отбора цитологически отрицательных, но ВПЧ-положительных лиц с высоким риском при комбинированном цитологическом и ВПЧ-скрининге; и ВПЧ в качестве первичного скрининга для лиц с высоким риском Технология CINtec PLUS может эффективно уменьшить недодиагностику высокоградусных поражений шейки матки, предоставляя достаточно времени и доказательств для клинического лечения и ухода за пациентами, а также улучшая выявление и раннее вмешательство при ранее существовавших заболеваниях шейки матки. Он также может уменьшить количество ненужных кольпоскопий и избежать их. Профессор Мэй Пинг из Народной больницы провинции Гуандун поделился на конференции данными клинического исследования CINtec PLUS. В ходе многостранового многоцентрового проспективного исследования PALMS (Primary ASCUS LSIL Marker Study) было обследовано более 27 000 женщин со средним возрастом 39,9 лет. В ходе исследования все женщины прошли традиционное цитологическое исследование (мазок Папаниколау), двойное окрашивание p16/Ki-67 (CINtec PLUS) и ВПЧ HC2, при этом конечной точкой исследования было подтверждение биопсией CIN2+. Исследование показало, что тест CINtec PLUS на 18% более чувствителен для выявления CIN2+ по сравнению с обычной цитологией без снижения специфичности (86,7% против 68,5%). Для сортировки ВПЧ-положительных женщин тест CINtec PLUS с двойным пятном был на 17% более чувствительным для CIN3 по сравнению с обычной цитологией (88% против 71%). Из 575 пациентов с цитологией ASC-US у 18 пациентов был подтвержденный биопсией CIN2 или выше, а двойное окрашивание CINtec PLUS имело 94% чувствительности и 78% специфичности и было выше, чем тестирование на ВПЧ HC2. Между тем, 63 из 526 пациентов с LSIL имели подтвержденный биопсией CIN2 или выше, а специфичность теста CINtec PLUS составила 54%, что намного выше, чем у теста на ВПЧ HC2. Кроме того, в рамках ретроспективного исследования EEMAPS (European Equivocal or Mildly Abnormal Papanicolaou Cytology) были проведены биопсия, двойное окрашивание p16/Ki-67 (CINtec Plus) и тестирование на ВПЧ HC2 в общей сложности 776 оставшихся образцов жидкостной цитологии ASC-US/LSIL (ThinPrep) из 5 европейских цитологических лабораторий в течение 6 месяцев после взятия цитологических проб. Из 361 пациента с ASC-US у 77 подтвердился CIN2 или более; из 425 пациентов с LSIL у 72 подтвердился CIN3 или более. Чувствительность теста CINtec PLUS для CIN3+ составила 96%, а специфичность — 68%, что на 49% выше, чем у теста на ВПЧ HC2, что позволяет предположить, что тест с двумя пятнами может быть более обоснованным. средства сортировки LSIL. При комбинированном цитологическом и ВПЧ-скрининге двухпятновой тест CINtec PLUS может применяться для сортировки тех, кто отрицателен по цитологии, но положителен по ВПЧ высокого риска. Результаты исследования, в котором приняли участие 425 женщин старше 30 лет, отрицательных по цитологии и положительных по ВПЧ высокого риска, показали, что двухпятновой тест CINtec PLUS имеет чувствительность 91,9% и специфичность 82,1% для CIN2+ и 96,4% и специфичность 76,9% для CIN3+. Профессор Го Хуайцинь из Онкологической больницы Академии медицинских наук также поделился своим опытом работы с CINtec PLUS, который позволяет эффективно снизить нагрузку на врача, проводящего обследование, благодаря двойному окрашиванию пленок. Кроме того, в случаях, когда морфологический диагноз затруднен, например, являются ли некоторые скопления переполненных клеток HSIL или реактивными изменениями, тест двойного окрашивания может быть использован в качестве диагностической помощи. Цитологический тест Roche Diagnostics CINtec PLUS позволяет проводить комбинированное определение p16 и Ki-67 с отличной специфичностью и чувствительностью. Сигнал p16 (коричневый) и сигнал Ki-67 (красный) в одной и той же клетке считаются положительными при одновременном наличии коричневого окрашивания цитоплазмы и красного окрашивания ядра. Ожидается, что тест будет доступен в Китае к концу 2015 года. Гистологический тест p16: повышение точности патологической диагностики и руководство клинической диагностикой рака шейки матки Профессор Чжао Юнь из Народной больницы Пекинского университета обсудил значение использования p16 в клинической практике с точки зрения клинициста. В частности, профессор Чжао подчеркнул ущерб, наносимый пациентам чрезмерным лечением поражений шейки матки, и вытекающую из этого клиническую необходимость в точных результатах патологической диагностики для руководства лечением пациентов. Обычно цервикальные сквамозные эпителиальные предраковые поражения, или цервикальная интраэпителиальная неоплазия (CIN), классифицируются как CIN1, CIN2 и CIN3 в зависимости от степени поражения, а клинические стратегии лечения различаются в зависимости от степени поражения. Более точная градация CIN необходима для принятия клинических решений о лечении. Хотя интерпретация гистоморфологии окрашивания H&E (окрашивание гематоксилином-эозином) является современным стандартом для классификации CIN, она подвержена субъективному суждению патолога и особенно плохо воспроизводима в CIN2. По мере продолжения фундаментальных и клинических исследований связь между ВПЧ и раком шейки матки становится все более ясной, и постепенно признается, что ВПЧ, присутствуя в свободном состоянии в клетках шейки матки, обычно вызывает низкосортные поражения шейки матки (LSIL), которые имеют очень низкий риск дальнейшего развития рака шейки матки и не являются истинными предраковыми поражениями; присутствуя в интегрированной форме в клетках хозяина, они вызывают высокосортные поражения шейки матки (HSIL), которые являются истинными предраковыми поражениями. Это настоящее предраковое заболевание с высоким риском прогрессирования до рака шейки матки. Исходя из этого, Американская академия патологии (CAP) и Американское общество кольпоскопии и патологии (ASCCP) совместно опубликовали консенсус (проект LAST), в котором рекомендовали двухуровневую номенклатуру для цервикальных сквамозных интраэпителиальных поражений, разделенных на поражения низкой и высокой степени. Первая включает CIN1 в трехуровневую номенклатуру, а вторая — CIN2 и CIN3. Четвертое издание классификации ВОЗ опухолей женских половых органов, опубликованное в 2014 году, также рекомендует эту номенклатуру. На практике, однако, существует меньше последовательности в диагностике H&E для CIN2, и даже в США, где патологоанатомы проходят строгую подготовку, между врачами существуют значительные разногласия по поводу диагноза в одном и том же случае. В действительности, часть CIN2 является действительно высокосортным поражением, а значительная часть — низкосортным. Когда морфологическая идентификация поражений высокого или низкого класса является спорной, рекомендуется использовать биомаркеры для помощи в дифференциальной диагностике. Проект LAST продемонстрировал, что использование p16INK4a обеспечивает высокое качество доказательств для улучшения диагностической согласованности и рекомендует его использование в четырех ситуациях: когда требуется дифференциальная диагностика HSIL и подобных неопластических поражений, таких как незрелая сквамозная, атрофическая, репаративная эпителиальная гиперплазия и артефакты из-за ручной манипуляции; сомнительный CIN2; различные диагностические мнения между рецензентами; ВПЧ. тестирование, цитология, кольпоскопия, предполагающие возможность поражения высокой степени, но отрицательный гистологический диагноз. Основываясь на данных проекта LAST, в 2014 году ВОЗ также рекомендовала использовать иммуногистохимическое окрашивание p16INK4a для сомнительных диагнозов, чтобы повысить точность гистологической диагностики поражений шейки матки и согласованность диагноза между патологоанатомами. CAP и ASCCP рекомендуют такое же ведение LSIL, как и CIN1, а HSIL, для большинства женщин, как и CIN2/3. p16INK4a-положительные случаи рассматриваются как поражения высокой степени (HSIL), и рекомендуется лечение. По данным исследования SEER, заболеваемость раком шейки матки у женщин моложе 25 лет составляет всего 1,5/100 000, поэтому у молодых женщин с HSIL (CIN2) или HSIL без определенного CIN2 или 3, цитологию и кольпоскопию можно проводить каждые 6 месяцев и назначать лечение, если поражение сохраняется в течение 24 месяцев, если кольпоскопия неудовлетворительна, если поражение увеличивается в размерах или если кольпоскопия хуже, чем раньше. ранее, то назначается лечение. Биомаркер p16INK4a позволяет более микроскопически понять патологические механизмы предраковых поражений шейки матки, повышает точность интерпретации LSIL/HSIL и обеспечивает более рациональное клиническое ведение пациентов в триаже. Гистологический p16-тест CINtec от Roche Diagnostics (содержащий антитело против p16INK4a (E6H4)) был запущен в Китае в мае 2014 года.