Определить распределение эпителиальных стволовых клеток на барабанной мембране, изменения стволовых клеток после перфорации барабанной мембраны, характеристики роста различных частей эпителия барабанной мембраны в культуре in vitro и создать метод для культуры in vitro и пролиферации стволовых клеток барабанной мембраны. У четырех молодых крыс SD и четырех взрослых крыс SD наблюдали нормальную барабанную перепонку, а у 28 взрослых крыс перфорировали центральные 2 мм натяжения барабанной перепонки. Замороженные участки барабанных перепонок были взяты в разное время после перфорации для иммуногистохимического обнаружения β1-интегрина и кератина 19. У 30 взрослых крыс SD барабанные перепонки были повреждены митомицином C на поверхности слизистой оболочки и разделены на две части, эпителий барабанного кольца и напряженный центральный эпителий, чтобы сравнить время пролиферации клеток в барабанном кольце и напряженной части. Клетки барабанного кольца были классифицированы в соответствии со временем прикрепления, используя 1 час в качестве стандарта. Кератин 19 и β1-интегрин-позитивные клетки были распределены в барабанном кольце и в области ножки молоточковой кости в напряженной части и рассеяны в расслабленной части, без положительных клеток в центральной части напряженной части. Разницы между молодыми и взрослыми крысами не было. Количество положительных клеток в барабанном кольце и ножке молоточковой кости увеличивалось после острой перфорации напряженной части, а по краю перфорации положительное окрашивание отсутствовало. В культуре in vitro эпителиальным клеткам барабанного кольца требовалось значительно меньше времени для размножения, чем центральному эпителию напряженного конца, а клетки, прилипшие к стенке в течение 1 часа, активно росли, образовывали более крупные колонии и были богаты эпителиальными стволовыми клетками. Эпителиальные стволовые клетки были распределены в области тимпанального кольца и ножки молоточковой кости в напряженной части тимпанальной мембраны, при этом в центральной части напряженной части стволовые клетки отсутствовали. В соответствующей культуральной среде стволовые клетки хорошо пролиферировали и могли быть первоначально очищены по времени аппликации.