Рак желудка — одна из наиболее распространенных злокачественных опухолей пищеварительного тракта в Китае, с высоким уровнем заболеваемости и смертности во всем мире. Из-за быстрого развития и низкой частоты раннего выявления болезнь часто находится на средней и поздней стадиях после появления симптомов, а эффект лечения часто бывает слабым, представляя серьезную угрозу для здоровья человека. Углубленное изучение механизма развития рака желудка имеет большое клиническое значение для руководства лечением рака желудка.
Паксиллин — важный фактор клеточной адгезии, открытый в последние годы. Он является субстратом опухолеродной тирозинкиназы, ассоциирован с интегринами и представляет собой ключевой участок локальной адгезии между клетками и внеклеточным матриксом, регулируя движение и рассеивание клеток, тем самым усиливая способность опухолевых клеток к метастазированию и инвазии.
Сосудистый эндотелиальный фактор роста (VEGF) является мощным проангиогенным фактором, высокоспецифичным сосудистым эндотелиальным митогеном и гликозилированным секреторным пептидом, который способствует образованию неоваскуляризации в опухолевых тканях, тем самым способствуя росту и прогрессии опухоли. Чтобы понять экспрессию Paxillin и VEGF в тканях узлового рака желудка и их связь с клиникопатологическими особенностями рака желудка, мы использовали иммуногистохимию для определения уровня экспрессии белков Paxillin и VEGF в тканях рака желудка и исследования их связи с биологическим поведением рака желудка.
1. материалы и методы
1.1 Материалы Пятьдесят пять случаев хирургической резекции образцов рака желудка были собраны с 2009-01 по 2009-07 гг. в Первом клиническом медицинском колледже Медицинского университета Шаньси. Среди них было 38 мужчин и 17 женщин, соотношение мужчин и женщин составило 2,24:1; возраст варьировался от 39 до 81 года, средний возраст составил 63,56±10,58 лет; патологическая классификация: 49 случаев аденокарциномы, 6 случаев индолентноклеточной карциномы; 38 случаев низкой дифференцировки, 11 случаев промежуточной дифференцировки и 6 случаев высокой дифференцировки; стадия PTNM (международный стандарт стадирования UICC 1997): 10 случаев I стадии, 13 случаев II стадии, 16 случаев III стадии. В вышеуказанных случаях предоперационная лучевая терапия не проводилась.
Во всех вышеперечисленных случаях перед операцией не проводилась лучевая или химиотерапия. Двадцать случаев были случайным образом отобраны из нормальных краев желудка вышеуказанных 55 пациентов с раком желудка в качестве контрольной группы. Все образцы были патологоанатомически подтверждены, (зафиксированы) в 10% (нейтральном) формальдегиде, (парафинированы) и срезаны с толщиной 4 мкм.
1.2 Методы Использовалось иммуногистохимическое двухэтапное окрашивание. Первичные антитела Paxillin и VEGF были приобретены у компании Fuzhou Maixin Biotechnology Development Co. Срезы подвергались автоклавному восстановлению тканевого антигена. Процедура окрашивания проводилась в соответствии с инструкциями набора. Известные положительные срезы использовались в качестве положительного контроля, а в качестве отрицательного контроля вместо первичного антитела использовался PBS.
1.3 Оценка результатов Положительная экспрессия паксиллина и VEGF определялась как наличие коричневато-желтого гранулированного материала в цитоплазме. В каждом срезе подсчитывали пять репрезентативных полей с большим увеличением, в каждом поле подсчитывали 100 клеток, процент положительных клеток и интенсивность окрашивания оценивали отдельно. Конкретные критерии оценки были следующими.
(1) Оценка в зависимости от степени окрашивания: 0 — отсутствие окрашивания, 1 — слабое окрашивание (желтоватое или желто-коричневое окрашивание только отдельных клеток), 3 — сильное окрашивание (желто-коричневое окрашивание) и 2 — умеренное окрашивание (окрашивание между первыми двумя показателями);
(2) Баллы в зависимости от процента окрашенных клеток: 0 баллов за окрашенные клетки <5% от числа подсчитанных клеток, 1 балл за 5-25%, 2 балла за 26-50%, 3 балла за 51%-75%, 4 балла за >75%. (1)+(2) — общий балл, при этом общий балл может быть от 0 до 7. Оценка 0 — отрицательная (-), оценка от 1 до 2 — слабо положительная (+), оценка от 3 до 5 — положительная (++) и оценка от 6 до 7 — сильно положительная (++++).
1.4 Статистика Все данные были проанализированы с помощью статистического пакета SPSS 17.0. Сравнение качественных данных проводилось с помощью теста χ2 и метода точной вероятности Фишера.
2. Результаты
2.1 Экспрессия Paxillin в тканях рака желудка и нормальных тканях режущего края
Положительная экспрессия белка Paxillin определялась как наличие желтого гранулированного материала в цитоплазме, преимущественно локализованного в цитоплазме. Среди 55 случаев тканей рака желудка, 37 были положительными, с процентом положительных результатов 67,27%, включая 5 сильно положительных случаев, 13 положительных случаев, 19 слабо положительных случаев и 18 отрицательных случаев. Среди 20 случаев нормальных тканей режущего края желудка, 4 случая были положительно выражены, включая 1 сильно положительный, 1 положительный и 2 слабо положительных, с коэффициентом положительности 20,00%. Экспрессия белка Paxillin в тканях рака желудка была значительно выше, чем в группе нормального режущего края, и разница была значительной (P<0,01). 2.2 Экспрессия VEGF в тканях рака желудка и нормальных тканях режущего края Положительная экспрессия VEGF определялась как появление желтого гранулированного материала в цитоплазме, который в основном локализовался в цитоплазме. Среди 55 случаев тканей рака желудка, 40 случаев были положительными, с процентом положительных результатов 72,72%, включая 5 сильно положительных случаев, 13 положительных случаев, 22 слабо положительных случая и 15 отрицательных случаев. Среди 20 случаев нормальных тканей режущего края желудка, 7 случаев были положительно выражены, включая 1 случай сильно положительный, 2 случая положительных и 4 случая слабо положительных, с процентом положительных результатов 35,00%. Экспрессия VEGF в тканях рака желудка была значительно выше, чем в группе нормального режущего края, и разница была значительной (P<0,01). 2.3 Связь между экспрессией белка Paxillin и клиническими особенностями и патологическими параметрами Положительная экспрессия паксиллина была связана с размером опухоли, степенью дифференцировки тканей, глубиной инфильтрации рака желудка, стадией TNM и метастазами в лимфатические узлы, и разница между группами была значительной (P<0,05), но не с полом и возрастом. 0,05), но не пол, возраст и размер опухоли. 3. Обсуждение Взаимосвязь между клеточной адгезией и опухолью является одной из популярных тем исследований в области биологии в последние годы. Паксиллин - это сигнальный адаптерный белок с относительной молекулярной массой 68×103, который в основном находится в адгезионных пятнах и составляет локальную адгезию между клетками и внеклеточным матриксом. Он также является важным местом для клеточной сигнализации. На ранних стадиях активации интегринов наблюдается тирозиновое фосфорилирование нескольких ассоциированных с интегринами белков, включая паксиллин. Существует определенная связь между паксиллином и инфильтрацией опухолевых клеток и метастазированием. Экспрессия паксиллина была значительно выше в тканях средне- и низкодифференцированной аденокарциномы желудка, чем в тканях высокодифференцированной аденокарциномы, в тканях прогрессирующего рака желудка, чем в тканях раннего рака желудка, и в тканях первичного рака желудка, чем в тканях метастазов лимфатических узлов. Экспрессия паксиллина была значительно выше в тканях рака пищевода и была связана с клинической стадией и метастазами лимфатических узлов. Paxillin также высоко экспрессировался при колоректальном раке и был тесно связан с глубиной инфильтрации раковой ткани в стенку кишечника и метастазированием в лимфатические узлы. У пациентов с гепатоцеллюлярной карциномой положительный уровень паксиллина был выше в низкодифференцированной группе, чем в высокодифференцированной группе, и выше в группе с тромбозом воротной вены, чем в группе без тромбоза, и выше в группе с внепеченочными метастазами, чем в группе без внепеченочных метастазов; в тканях рака легких более половины пациентов с положительной экспрессией паксиллина имели метастазы в лимфатических узлах, в то время как менее одной пятой пациентов с отрицательной экспрессией паксиллина имели метастазы в лимфатических узлах. Экспрессия Paxillin, вероятно, связана с развитием и метастазированием рака желудка и может быть показателем инфильтративного метастазирования и плохого прогноза пациента. Настоящее исследование показало, что высокая экспрессия белка Paxillin в тканях рака желудка значительно отличалась от нормальных тканей края желудка (P<0,01), а положительная экспрессия Paxillin была связана с размером опухоли, дифференцировкой тканей, глубиной инфильтрации рака желудка, стадией TNM и метастазами в лимфатические узлы, со значительными различиями между группами (P<0,05). Это показывает, что Paxillin участвует в возникновении и развитии рака желудка и является фактором, влияющим на плохой прогноз рака желудка. Сосудистый эндотелиальный фактор роста (VEGF), также известный как фактор проницаемости сосудов (VPF), является фактором роста, который действует специфически на сосудистые эндотелиальные клетки. В последние годы связь между VEGF и злокачественными опухолями стала предметом особого внимания, и было проведено больше исследований. Было установлено, что повышение экспрессии VEGF в тканях злокачественных опухолей может способствовать опухолевому ангиогенезу, который является чрезвычайно важным этапом в процессе возникновения, развития и метастазирования опухоли. Обильная неоваскуляризация опухоли, с одной стороны, транспортирует кислород, питательные вещества и метаболиты для удовлетворения потребностей неограниченного роста опухолевых тканей; с другой стороны, неполная базальная мембрана неоваскуляризации и повышенная проницаемость сосудов также создают удобные условия для инфильтрации и метастазирования опухоли. Было показано, что ген VEGF высоко экспрессируется в тканях рака желудка, и он значительно коррелирует с глубиной инфильтрации опухоли, клинической стадией и лимфатическим метастазированием. Экспрессия VEGF в тканях рака желудка была связана со степенью дифференциации тканей, глубиной инфильтрации рака желудка, стадией TNM и метастазированием в лимфатические узлы, что позволяет предположить, что VEGF является влиятельным фактором плохого прогноза рака желудка. В заключение, Paxillin и VEGF участвуют в возникновении и развитии рака желудка и являются влиятельными факторами плохого прогноза рака желудка. Экспрессия обоих показателей тесно связана со степенью дифференцировки тканей, глубиной инфильтрации рака желудка, стадией TNM и метастазированием в лимфатические узлы, что позволяет предположить, что комбинированное определение экспрессии Paxillin и VEGF в тканях рака желудка является более точным, чем один показатель, для определения прогноза. В случаях с метастазами в регионарные лимфатические узлы положительная экспрессия Paxillin и VEGF была значительно выше, что свидетельствует о повышенном риске метастазирования в регионарные лимфатические узлы при раке желудка, что имеет определенное руководящее значение для радикального объема хирургического лечения рака желудка и послеоперационной химиотерапии. Кроме того, паксиллин и VEGF взаимодействуют друг с другом при развитии рака желудка, а VEGF способствует миграции и инфильтрации опухолевых клеток путем тирозинового фосфорилирования паксиллина, что в свою очередь усиливает экспрессию паксиллина. Таргетное воздействие на Paxillin может не только остановить опухолеобразование и развитие опухоли, но и подавить опухолевый ангиогенез и повысить чувствительность опухоли к химиотерапевтическим препаратам.