Методы выявления и клиническое значение восьми пунктов хирургической инфекции
Отделение инфекционных заболеваний, Главный госпиталь ВВС (100036) Чжоу Пинг
Восемь тестов на хирургическую инфекцию являются обязательными предоперационными тестами во всех больницах, включая: пять сывороточных маркеров вируса гепатита В (поверхностный антиген гепатита В (HBsAg), поверхностное антитело гепатита В (анти-HBs), антиген гепатита В е (HBeAg), антитело гепатита В е (анти-HBe), антитело к ядру гепатита В (анти-HBc), антитело к вирусу гепатита С (анти-HCV), антитело к антигену ВИЧ (анти-HIV), специфическое антитело к сифилису (анти-HCV). HCV), антитела к антигенам ВИЧ (анти-HIV) и сывороточные специфические антитела к сифилису (анти-ТФ). Цель — предотвратить, уменьшить и избежать перекрестного инфицирования и передачи этих вирусов в больнице во время операции, а также предотвратить медицинские риски и медицинские споры. В этой статье мы кратко представим методы тестирования и клиническое значение восьми пунктов хирургической инфекции в нашей больнице следующим образом. Чжоу Пин, отделение инфекционной медицины, Главный госпиталь ВВС США
I. Методы обнаружения.
В настоящее время в большинстве отечественных больниц для выявления восьми пунктов хирургической инфекции используются в основном три иммунологических метода: два иммуноферментных анализа (EIA и ELISA) и хемилюминесцентный микрочастичный иммуноанализ (далее: хемилюминесцентный метод). Преимущества первого: высокая специфичность и чувствительность, низкая стоимость; недостатки: более сложная операция, требует много времени, только качественное определение; преимущества второго: высокая специфичность и чувствительность, прост в эксплуатации, быстрый, количественный (например: HbsAg и анти-HBs)/полуколичественный анализ; недостатки: стоимость определения выше.
II. Клиническое значение.
(А) Клиническое значение пяти элементов анализа на гепатит В
HBsAg, анти-HBs, HBeAg, анти-HBe и анти-HBc — пять показателей, широко известных как «гепатит В пять» или «гепатит В два с половиной». Как правильно проанализировать клиническое значение этих показателей — проблема, с которой часто сталкиваются клиницисты и которая кажется им сложной.
1. Поверхностный антиген гепатита В (HBsAg)
HBsAg является маркером инфекции HBV и первым вирусным маркером, который появляется в сыворотке крови. Время появления HBsAg связано с путем заражения HBV и дозой инфекции. При переливании HBsAg-положительной крови HBsAg может быть обнаружен через 2 недели, при определении методом РИА HBsAg положительный в сыворотке может появиться через 6 дней после вакцинации; если доза инфекции мала, время появления HBsAg положительного может составлять 3-4 месяца или даже 6 месяцев; в целом HBsAg положительный может появиться через 4-6 недель после заражения HBV. (в среднем около 4 недель) до появления симптомов гепатита и нарушений функции печени. Инкубационный период составляет около 2 месяцев при инфекциях, передающихся через кровь, и около 3 месяцев при оральных инфекциях.
Течение острого гепатита В обычно длится 1-3 месяца, и от 80% до 90% пациентов могут быть клинически излечены [1]. Позитивность HBsAg в крови обычно длится 1-6 недель и до 20 недель (14-148 дней) в самых длительных случаях; она исчезает через 1-4 недели после появления симптомов гепатита или после пика сывороточных трансаминаз Если позитивность HBsAg сохраняется более 6 месяцев и все еще не становится отрицательной, это называется персистентной позитивностью или хроническим статусом носительства; если речь идет об остром гепатите В, позитивность HBsAg более 6 месяцев свидетельствует о хронической форме. Продолжительность HBsAg-позитивности и доля хронического течения острого гепатита В связаны с возрастом инфицированного, и чем моложе возраст, тем больше вероятность формирования персистирующей инфекции или хронического состояния [2]. Чем моложе возраст, тем выше вероятность формирования персистирующей инфекции или хронического течения заболевания; 80% младенцев, инфицированных в перинатальном периоде, станут носителями HBsAg; около 30% инфицированных в раннем детстве станут постоянными носителями HBsAg, а доля нормальных взрослых, инфицированных HBV, у которых формируется персистирующая инфекция, может составлять менее 5%; около 35-50% HBsAg-положительных носителей в общей популяции общества инфицируются в перинатальном периоде от матери к ребенку [ 3]. Недавние исследования показали, что после острой инфекции HBV у взрослых только 1-3% становятся хроническими, а подавляющее большинство излечивается. Каганов и др. [2, 3] наблюдали 129 детей в возрасте до 15 лет с истинной острой инфекцией в течение 2-24 месяцев, 115 из них были вылечены, и у подавляющего большинства вырабатывались анти-HBs, а 14 (в возрасте до полугода) умерли от фульминантного гепатита, причем хронической формы не наблюдалось. Это указывает на то, что большинство случаев острого гепатита В имеют хороший прогноз при отсутствии хронической формы. Однако при хронических инфекциях HBV конверсия HBsAg очень затруднена: ежегодная частота отрицательной конверсии HBsAg составляет 0,8% у хронически инфицированных пациентов с нормальной гистологией печени и 0,5% у пациентов с гистологически подтвержденным хроническим гепатитом [4].
Позитивность HBsAg указывает на инфицирование HBV, а его инфекционный статус имеет два условия: ① полная вирусная репликация и инфекционный. В этом случае другие показатели вирусной репликации также положительны, такие как HBeAg, HBVDNA, HBVDNA-P и Pre-S1, S2 и т.д.; (2) нет полной вирусной репликации, не инфекционный; интеграция HBVDNA в геном клетки-хозяина, гены, экспрессирующие другие вирусные белки, потеряны, только экспрессия HBsAg без полного образования вируса [2]. Клинически позитивность HBsAg наблюдается в латентной и острой фазах у пациентов с острым гепатитом В; хроническим гепатитом В, у бессимптомных носителей; в сыворотке некоторых пациентов с циррозом и раком печени и в плазме инфицированных HBV гепатоцитов.
Положительный HBsAg обычно указывает на наличие HBV-инфекции в организме, но отрицательный не исключает полностью HBV-инфекцию. Причинами этого являются: (i) HBsAg может быть пропущен из-за очень низкого уровня HBV и HBsAg, метод обнаружения недостаточно чувствителен, или могут возникать ложноотрицательные результаты из-за качества реагентов и проблем с обращением; (ii) мутации S гена вызывают нарушение экспрессии и секреции HBsAg, и HBsAg не может быть измерен в сыворотке или встречается редко, несмотря на присутствие HBV в организме [5,6]; (iii) HBsAg, экспрессированный после мутаций S гена, не может быть измерен некоторыми реагентами, широко используемыми в настоящее время [7,8]. Последние два варианта, хотя HBsAg отрицательный, часто сопровождаются положительной реакцией на другие маркеры инфекции HBV, такие как HBeAg, анти-HBe и анти-HBc. Даже если HBV-инфекция действительно отрицательна, ее нельзя полностью исключить, поскольку у 8% пациентов с гепатитом В HBsAg становится отрицательным до появления симптомов; если анти-HBs или анти-HBe оказываются положительными через 2-9 месяцев после начала заболевания, диагноз острого гепатита В все еще может быть поставлен [9]. При фульминантном гепатите В часто анти-HBs появляются рано, в то время как HBsAg отрицателен; острый гепатит В может возникнуть после переливания HBsAg-отрицательной, но анти-HBc-положительной крови. Наличие HBVDNA в сыворотке некоторых HBsAg-отрицательных больных гепатитом и доноров крови может быть дополнительно подтверждено с помощью методов ПЦР [10].
При анализе положительных результатов на HBsAg следует обратить внимание на несколько моментов: ① О тяжести гепатита или заболевания инфицированного человека нельзя судить по уровню титра HBsAg. Поскольку титр HBsAg в сыворотке крови инфицированных HBV пациентов часто колеблется, не существует прямой зависимости между его титром и заболеванием. Титр HBsAg не может быть использован для определения типа гепатита. Сам HBsAg не содержит вирусной нуклеиновой кислоты и не является инфекционным, но HBsAg-положительная сыворотка, независимо от ее титра, может содержать инфекционные дозы вирусных частиц. Если HBVDNA интегрирована в ДНК гепатоцита хозяина, в сыворотке нет свободных вирусных частиц, и в это время HBsAg-положительная кровь не является инфекционной. ④ Титр HBsAg нельзя использовать в качестве показателя для оценки или суждения об эффективности клинического лечения тем или иным препаратом. Как упоминалось ранее, HBsAg не отражает тяжесть заболевания и не содержит компонент нуклеиновой кислоты вируса, которая сама часто колеблется, поэтому нет никаких научных оснований для того, чтобы повышение или понижение титра HBsAg указывало на эффект лекарственного препарата [11].
2. поверхностные антитела гепатита В (анти-HBs)
Анти-HBs — это нейтрализующее антитело, которое обеспечивает защитный иммунитет против HBV, нейтрализуя инфекцию HBV и предотвращая реинфекцию. У большинства пациентов с самоограничивающейся инфекцией HBV анти-HBs появляются в период восстановления после острой инфекции. У 80% пациентов анти-HBs появляются в течение нескольких недель или месяцев после исчезновения HBsAg и стихания клинических симптомов. Раннее появление и титр анти-HBs связаны с повторными инфекциями. Частота позитивности анти-HBs наиболее высока в период выздоровления при остром гепатите В и низка при всех других типах гепатита В. Как правило, анти-HBs-позитивная сыворотка отрицательна для HBsAg/анти-HBs-IgM и нормальна для АЛТ.
Анти-HBs позитивность может наблюдаться при: (1) при выздоровлении от гепатита В; (2) у пациентов с предыдущей инфекцией HBV; (3) после вакцинации против гепатита В; (4) при некоторых случаях фульминантного гепатита В; Пациенты, выздоравливающие после естественной инфекции, имеют двойную положительную сыворотку анти-HBs и анти-HBc, и поскольку анти-HBc сохраняется в течение более длительного периода времени (>8-10 лет), а анти-HBs сохраняется в течение более короткого периода времени (6 месяцев ～Одиночный положительный анти-HBs встречается редко (за исключением вакцинации против гепатита В), а одиночный положительный анти-HBs с низким титром в основном является ложноположительным из-за неспецифической реакции [2].
В клинической практике иногда встречается одновременная положительная реакция на HBsAg и анти-HBs, о чем сообщается за рубежом, где общая частота встречаемости всех типов гепатита составляет 32%; в Китае — 5,75%. Это наблюдается в следующих ситуациях: (1) фаза динамического равновесия антигена и антитела; (2) ложноположительные анти-HBs; (3) двойная инфекция с различными подтипами HBsAg или реинфекция тем же типом HBV; (4) ненормальная иммунная функция организма, после мутации вирусного S гена, которая явно изменяет антигенную структуру HBsAg, так что он не может реагировать с нейтрализацией анти-HBs дикого штамма, в результате чего анти-HBs дикого штамма и HBsAg мутантного штамма сохраняются одновременно в одном и том же организме [12], не могут справиться с HBsAg; (5) предыдущая инфекция HBV-1 или реципиенты вакцины против гепатита В реинфицированы HBV-2 [2].
Защитное действие анти-HBs на организм в последние годы было различным, и некоторые обнаружили, что случайное заражение HBV у анти-HBs-положительного медицинского персонала может произойти при остром гепатите В. Отечественный Luo anti-first [13] применил метод ПЦР для выявления 9 случаев анти-HBs-положительных пациентов и 4 случаев HBVDNA-положительных. Защитное действие анти-HBs на организм может быть связано с различными подтипами HBV инфекции, и анти-HBs одного подтипа защищают только против того же подтипа HBV инфекции, в то время как они не защищают или менее защищают против различных подтипов HBV инфекции. Кроме того, это также может быть связано со слишком низкой концентрацией эффективных анти-HBs в крови.
3. Антиген гепатита В e (HBeAg)
HBeAg — это растворимый компонент основного антигена гепатита В, который часто присутствует вместе с сывороточными HBVDNA, DNA-P и частицами Дейна, и является маркером репликации и заразности HBV. Обычно HBeAg появляется на 1 неделю позже HBsAg и исчезает на 2 недели раньше HBsAg; если HBeAg остается положительным более 10 недель, это указывает на то, что заболевание может иметь тенденцию к хроническому течению. Позитивность HBeAg в сыворотке крови наблюдается только при: остром гепатите с положительным HBsAg, хроническом гепатите, бессимптомном носительстве HBsAg и у некоторых пациентов с циррозом и раком печени. При хронических инфекциях частота позитивности HBeAg снижается с возрастом; ежегодный естественный отрицательный уровень HBeAg у больных хроническим гепатитом В составляет 25,6%. Бессимптомные носители составляют 9,3% [14].
Вообще говоря, HBeAg-позитивность проявляется только в HBsAg-положительных сыворотках; клинически HBsAg-негативность и HBeAg-позитивность иногда могут наблюдаться по следующим причинам: ① метод выявления HBsAg недостаточно чувствителен; ② интерференция ревматоидного фактора в сыворотке, что приводит к ложноположительной реакции. ③ HBsAg образует иммунные комплексы с анти-HBs, поэтому HBsAg не может быть измерен. ④ После исчезновения HBsAg и появления анти-HBs, HBV остается в сыворотке, а HBsAg на поверхности его частиц Дейна обволакивается анти-HBs, поэтому он не обнаруживается. ⑤ Качество и эксплуатация реагентов также могут привести к ложноположительным результатам на HBeAg [1].
4. антитела к гепатиту B e (анти-HBe)
Анти-HBe появляется после отрицательного HBeAg, и появление анти-HBe указывает на снижение инфекционности. В прошлом анти-HBe считалось показателем выздоровления от инфекции HBV или отсутствия инфекционности. В последние годы исследования показали, что анти-HBe положительные сыворотки все еще могут быть инфекционными, но они гораздо менее инфекционны, чем HBeAg положительные сыворотки. Такие же результаты наблюдались в исследованиях по передаче вируса от матери к ребенку: 80-100% младенцев, родившихся от матерей, которые были одновременно положительны на HBsAg и HBeAg, были инфицированы ВГВ; в то время как HBsAg-положительных сывороток было 10-2 — 10-5. Инфекция HBV была обнаружена у 80-100% младенцев, рожденных от матерей, которые были одновременно положительны на HBsAg и HBeAg, в то время как только 3% младенцев, рожденных от HBsAg-положительных и анти-HBe-положительных матерей, были инфицированы HBV. Эти результаты показывают, что HBeAg-положительные сыворотки значительно более заразны, чем анти-HBe положительные сыворотки; анти-HBe положительные сыворотки также в некоторой степени заразны [11].
В целом, у анти-HBe положительных пациентов уровень репликации HBV в сыворотках ниже, и их болезнь имеет тенденцию к стабилизации и выздоровлению, но у значительной части анти-HBe положительных пациентов клинически все еще можно наблюдать колебания болезни или ее развитие. Основная причина этого заключается в том, что HBV не устраняется анти-HBe позитивностью, и HBV все еще существует и реплицируется в организме. Одно исследование показало, что при хроническом активном гепатите с анти-HBe позитивностью, HBVDNA была обнаружена в сыворотке 87% пациентов с помощью метода ПЦР [10]. Внутрипеченочные анализы на HBsAg и HBcAg и исследования гибридизации HBVDNA in situ показали, что у 26,7% анти-HBe-позитивных пациентов с хроническим гепатитом была активная репликация HBV, у 53,3% — неполная репликация и экспрессия, и только у 20% — нерепликативное состояние. Серологическая конверсия HBeAg в анти-HBe при хроническом гепатите В может сопровождаться повышением уровня АЛТ и последующим снижением уровня репликации HBV, но это не означает полного избавления от HBV [2, 10]. HBeAg может быть обнаружен в сыворотке носителей HBV с нормальной гистологией печени, в то время как пациенты с гистологически подтвержденным наличием хронического активного гепатита могут быть положительны на анти-HBe в сыворотке, что указывает на то, что HBeAg не обязательно является маркером активности хронического гепатита В, и анти-HBe не может быть использован в качестве индикатора здорового носительства.
Анти-HBeAg обычно не бывает положительным одновременно с HBeAg, если есть сообщение об одновременном обнаружении, это может быть связано с различными подтипами (e1, e2, e3) инфекции; анти-HBeAg и HBeAg отрицательный одновременно также редки, это может наблюдаться в: ① титры HBeAg и анти-HBe слишком низкие, чувствительность метода анализа недостаточна; ② в момент обнаружения HBeAg исчезает, а соответствующего антитела еще нет (3) некоторые носители HBsAg имеют синдром приобретенного иммунодефицита и не способны образовывать анти-HBe [15].
5. основное антитело гепатита В (анти-HBc)
Anti-HBc — это антитело, которое появляется раньше в системе антител к HBV, и может быть обнаружено через 3-5 недель после появления HBsAg при острой HBV-инфекции и до появления клинических симптомов, и имеет высокий титр в период выздоровления от гепатита; чем дольше время позитивности HBsAg, тем выше титр anti-HBc [2, 9]. Клинически анти-HBc в основном определяются методом конкурентного ингибирования как суммарные антитела, включая анти-HBc типа IgG, IgM, IgA и IgE, причем анти-HBcIgM преобладают на ранней стадии и сохраняются от 6 до 18 недель, а анти-HBcIgG преобладают позже и могут сохраняться в организме в течение многих лет или даже десятилетий [11]. Обычно высокопотентные анти-HBc наблюдаются при остром и хроническом гепатите и у носителей HBsAg и указывают на то, что репликация HBV может быть еще активной и сыворотка инфекционна; низкопотентные анти-HBc указывают на предшествующую инфекцию HBV и, как правило, не инфекционны.
Однократный положительный анти-HBc — обычная картина в клинике, и частота его встречаемости варьируется в разных местах, по разным данным, примерно от 0,9 до 11,9%. Для объяснения единичного положительного анти-HBc Центр по контролю заболеваний США указывает [16]: после исключения ложноположительных (подавление ≤ 70% в большинстве случаев является ложноположительным) результатов теста, существует несколько причин: ① Раннее восстановление после острой инфекции (период окна). HBsAg снижается или исчезает, а анти-HBs еще не вырабатывается, и анти-HBc является единственным специфическим индикатором HBV, который может быть обнаружен. ② пассивно приобретенный анти-HBc. младенцы, рожденные от матерей-носителей HBsAg, анти-HBc типа IgG у матери могут передаваться младенцу через плаценту, такой материнский анти-HBc может существовать у младенца более одного года; переливание анти-HBc-положительной крови или продуктов крови. (iii) Дистанционная инфекция с исчезновением анти-HBs. Поскольку анти-HBc может сохраняться более 8-10 лет, в то время как анти-HBs сохраняется в организме только от 6 месяцев до 3 лет. ④ Дистанционная инфекция с низким уровнем HBsAg. В последние годы было высказано предположение, что однократный положительный анти-HBc является маркером инфекции вируса гепатита С (ВГС), и считается, что антигены ВГС имеют тот же антигенный компонент, что и HBcAg. Однако проспективное исследование Hoyos и др. по изучению гепатита не-А не-В после переливания крови у пациентов, перенесших кардиохирургическое вмешательство, не подтвердило эту точку зрения [17-19].
В заключение следует отметить, что пять сывороточных маркеров вируса гепатита В, которые представляют собой только антигенные вещества, экспрессируемые генами HBV, и соответствующие антитела, вырабатываемые этими антигенами, стимулирующими организм, сами не являются компонентами нуклеиновой кислоты вируса и, следовательно, сами по себе не являются инфекционными, а являются только маркерами инфекции HBV. Поскольку один положительный HBVM может наблюдаться в самых разных ситуациях, а различные комбинации различных HBVM имеют разное клиническое значение, при анализе клинического значения «пятерки гепатита В» нельзя изолированно и однобоко анализировать один из показателей, а следует обратиться к нескольким другим показателям, а иногда и к HBVDNA. DNA-P, Pre-S1, S2 и другие тесты также должны сочетаться с клиническим анализом, чтобы вынести правильное суждение и точную оценку.
Простое суждение о клинической значимости пяти пунктов гепатита В: в целом, пять сывороточных маркеров гепатита В, если маркеры вирусного антигена (HBsAg/HBeAg) положительные, указывают на наличие инфекции вируса гепатита В; антиген, антитела отрицательные, вирусной инфекции нет; антиген отрицательный, одно или несколько антител положительные, указывают на предыдущую инфекцию или период восстановления, вирус был очищен.
(ii) Антитела к вирусу гепатита С (анти-HCV).
Инкубационный период после заражения ВГС составляет 21-84 дня (в среднем 50 дней), РНК ВГС может быть обнаружена в крови в течение 1-2 недель после заражения, при этом в среднем через 50 дней в сыворотке крови повышается АЛТ. Реагенты для выявления анти-HCV постоянно совершенствовались, и сейчас они разработаны до 3-го и 4-го поколения, а чувствительность и специфичность тестов улучшены. Хотя частота обнаружения антител постепенно улучшается, все еще существуют недостатки, такие как позднее появление антител в течение болезни: антитела обнаруживаются в среднем через 12 недель после заражения и через несколько недель после повышения АЛТ. Анти-HCV могут быть обнаружены в сыворотке крови только у 50%-70% пациентов при появлении симптомов и до 90% пациентов через 3 месяца после заражения. У некоторых пациентов антитела не появляются из-за иммунодефицита; антитела также не могут различать острые, хронические и предыдущие инфекции, а уровень антител не соответствует заболеванию, поэтому их также нельзя использовать в качестве показателей для оценки тяжести, прогноза и лечения.
1.Метод тестирования.
Тест на выявление антител к вирусу гепатита С был впервые зарегистрирован Управлением по контролю за продуктами и лекарствами США (FDA) в 1990 году, и с тех пор новые версии таких тестов и другие утвержденные FDA тесты на анти-HCV широко используются для клинической диагностики и скрининга бессимптомных пациентов. В настоящее время в клинической практике широко используются следующие тесты.
(1), скрининговые тесты на анти-HCV: иммуноферментный анализ (HCV- EIA210; HCV- ELISA
310) и иммуноферментный анализ с усиленной хемилюминесценцией (CIA).
(2), паракринный тест на анти-HCV: рекомбинантный иммуноблоттинг-анализ (RIBA) — высокоспецифичный анализ результатов паракринного теста на анти-HCV и качественное/количественное выявление РНК HCV методом ПЦР.
2. Клиническое значение.
(1), Скрининговый анализ на анти-HCV.
Положительные результаты: текущая инфекция ВГС, предыдущая инфекция, ложноположительные результаты.
Отрицательные результаты: отсутствие HCV-инфекции, период окна HCV-инфекции, следовая HCV-инфекция.
(2), Recombinant Immunoblotting Assay (RIBA) — высокоспецифичный тест на анти-HCV в парацентезе.
Положительные результаты: текущая инфекция ВГС, предыдущая инфекция.
Отрицательные результаты: отсутствие HCV-инфекции, период окна HCV-инфекции, следы HCV-инфекции.
Клиническое значение анти-HCV следует анализировать в сочетании с сопутствующими тестами на анти-HCV (рекомбинантный иммуноблот тест (RIBA) — анализ результатов высокоспецифичного сопутствующего теста на анти-HCV и качественное/количественное выявление РНК HCV методом ПЦР) и функциональными тестами печени.
3. Общие клинические типы.
(1) Анти-HCV скрининговый тест (+) + RIBA (+) + HCV RNA (+) + ALT/AST (+): присутствующая инфекция, активный гепатит.
(2) Скрининговый тест на анти-HCV (+) + RIBA (+) + HCV RNA (+) + ALT/AST (-): текущая инфекция, вирусное носительство; неактивный гепатит.
(3) Скрининговый тест на анти-HCV (+) + RIBA (+) + HCV RNA (-) + ALT/AST (+), кроме других причин: текущая инфекция, активность гепатита.
(4) Анти-HCV скрининговый тест (+) + RIBA (+) + HCV RNA (-) + ALT/AST (-): предшествующая инфекция; следовое носительство HCV, требующее периодического повторного тестирования.
(5) Скрининговый тест на анти-HCV (+) + RIBA (-) + HCV RNA (-) + ALT/AST (+): ложноположительный результат; другие причины нарушений функции печени.
(6) Скрининговый тест на анти-HCV (+) + RIBA (-) + HCV RNA (-) + ALT/AST (-): ложноположительный результат.
(7) Скрининговый тест на анти-HCV (-) + RIBA (-) + HCV RNA (+) + ALT/AST (+): острое инфекционное окно; следовая HCV-инфекция; оккультный гепатит.
(8) Скрининговый анализ на анти-HCV (-) + RIBA (-) + HCV RNA (+) + ALT/AST (-): носительство следовой HCV-инфекции.
(9) Скрининговый анализ на анти-HCV (-) + RIBA (-) + HCV RNA (-) + ALT/AST (+): отсутствие HCV-инфекции; другие причины нарушений функции печени.
(10) Скрининговый анализ на анти-HCV (-) + RIBA (-) + HCV RNA (-) + ALT/AST (-): не инфицирован HCV.
4. Клиническое значение качественного/количественного обнаружения РНК ВГС методом ПЦР.
(1), ясная инфекция и виремия.
(2) Ранняя диагностика анти-HCV-негативного острого гепатита.
(3) Диагностика анти-HCV-отрицательного иммунокомпрометированного хронического гепатита.
(4), младенцы от хронически инфицированных ВГС матерей для уточнения передачи вируса от матери к ребенку.
(5), четкие показания к лечению до начала противовирусной терапии и оценка лечебного эффекта после лечения.
(3), тестирование на антитела к ВИЧ (анти-ВИЧ).
1, методы обнаружения: до сих пор серологические тесты остаются главной основой лабораторной диагностики ВИЧ. Серологические тесты, то есть анализ на антитела к ВИЧ, являются рутинным методом диагностики ВИЧ-инфекции, который делится на два этапа: первичный скрининговый тест и подтверждающий тест.
(1), скрининговый тест на антитела к ВИЧ: включает: иммуноферментный анализ (ELISA), тест агглютинации желатиновых частиц (PA), иммунохроматографический/пермеационный тест, тест быстрого обнаружения (RT) и др.
ИФА-анти-ВИЧ тест, является самым ранним и наиболее широко используемым тестом для выявления антител к ВИЧ на международном уровне. Начиная с первого поколения в 1985 году и заканчивая нынешними наборами четвертого и пятого поколения, чувствительность и специфичность значительно улучшились, а период «окна» для выявления ВИЧ постоянно сокращался. Хотя тест ИФА-анти-ВИЧ обладает высокой чувствительностью и специфичностью, существует небольшое количество ложноотрицательных и ложноположительных результатов. Ложноотрицательные результаты в основном возникают в период «окна» или в поздние сроки, когда титр антител снижается; ложноположительные результаты в основном обусловлены влиянием аутоиммунных заболеваний, заболеваний почек, печени, вакцинации и т.д., но в целом титр ложноположительных результатов обычно не высок.
(2), тест на подтверждение антител к ВИЧ.
Тесты на подтверждение антител к ВИЧ включают: иммуноблоттинг (Western Blot, WB); анализ иммунофлюоресценции (IFA); иммуноферментный анализ с полосками (LIF); радиоиммунопреципитационный анализ (RIPA) и т. д. В Китае часто используемым подтверждающим тестом является метод иммуноблота (WB), который отличается высокой специфичностью. ИФА для выявления ВИЧ-специфических антител (высокая чувствительность) в сочетании с ВБ (высокая специфичность) обеспечивает точность диагностики более 99%, а ложноположительный результат составляет около 0,00006%, в результате чего вероятность неправильного диагноза практически нулевая.
2. Диагностика ВИЧ-инфекции в период окна.
Анти-ВИЧ отрицательный, не обязательно отсутствие инфекции, может быть в период окна вирусной инфекции, то есть от заражения организма ВИЧ вирусом до выработки антител в течение этого периода, суть периода окна заключается в том, что специфические антитела вируса от отсутствия до наличия, от меньшего к большему процессу трансформации, есть два фактора, которые определяют продолжительность периода окна, один из них — степень антителового ответа организма на вирусную инфекцию, а другой — чувствительность метода обнаружения. Обычно средний срок составляет 2-3 месяца (может быть от 1 до 9 месяцев), но более 95% ВИЧ-1-инфицированных пациентов вырабатывают антитела менее чем за 6 месяцев. Для диагностики используются следующие методы.
(1), тест на антиген Р24.
После заражения организма ВИЧ, антиген P24 является ранним патогенным маркером, который может быть обнаружен в сыворотке крови, который может быть обнаружен примерно через 2~3 недели после заражения и входит в пик антигена примерно через 1~2 месяца, затем с выработкой антител образуются комплексы антиген-антитело, из-за эффекта нейтрализации антител, концентрация антигена P24 снижается до уровня, который трудно обнаружить. 100%.
(2), обнаружение РНК ВИЧ.
Использование молекулярно-биологической технологии ПЦР может быть качественным и количественным обнаружением нуклеиновой кислоты ВИЧ (РНК ВИЧ), с высокой чувствительностью и специфичностью, в раннем обнаружении и диагностике ВИЧ-инфекции имеет большое значение, а также является хорошим показателем для определения эффективности клинического лечения и оценки прогноза, а также является основной базой для разработки и корректировки планов лечения. В настоящее время широко используются клинические методы определения нуклеиновых кислот: ПЦР с обратной транскрипцией (RT-PCR) и количественная флуоресцентная ПЦР в реальном времени.
(D) Специфические антитела к сифилису в сыворотке крови (анти-ТФ)
1, серологический тест на инфекцию сифилиса.
Анализ на антитела к сифилису в сыворотке крови является важным методом клинической диагностики инфекции сифилиса. Через 4-6 недель после попадания спирохет сифилиса в организм, в сыворотке крови могут вырабатываться неспецифические антитела против липидоподобных антигенов и специфические антитела против антигенов спирохет сифилиса. Исходя из характеристик двух типов антител, вырабатываемых спирохетами сифилиса после попадания в организм, серологические тесты делятся на две основные категории.
(1) Серологические тесты на антигены спирохет, не относящиеся к сифилису: в том числе: ① лабораторный тест для исследования венерических заболеваний (VDRL); ② тест на сывороточный реактин без нагревания (USR); ③ тест на кольцевую карту с быстрым плазменным реактином (RPR); ④ тест на сыворотку с толуидиновым красным без нагревания (TRUST). В настоящее время наиболее часто используемыми репрезентативными методами являются RPR и TRUST. Они подходят для скрининга сифилиса, наблюдения за эффективностью и обследования на предмет рецидива или реинфекции.
(2) Серологический тест на антиген спирохеты сифилиса: включает: ① тест агглютинации желатиновых частиц спирохеты сифилиса (TPPA); ② тест агглютинации гематокрита спирохеты сифилиса (TPHA); ③ флуоресцентный тест адсорбции антител спирохеты сифилиса (FTA-ABS); ④ энзимно-связанный иммуносорбентный анализ спирохеты сифилиса (TP-ELISA); ⑤ белковый блот-тест спирохеты сифилиса (TP-WB) и др.
Методом обнаружения сывороточных специфических антител к сифилису (анти-ТФ) в восьми пунктах нашей хирургической инфекции является энзимно-связанный иммуносорбентный анализ на антигены спирохет сифилиса (TP-ELISA) в серологическом тесте на антигены спирохет сифилиса.
2, клиническое значение серологического теста на антиген спирохеты, не относящийся к сифилису.
(1), положительный результат может указывать на: ① настоящую инфекцию; ② рецидив или реинфекцию; ③ биологический ложноположительный результат.
(2), клиническое использование для скрининга на сифилис, наблюдение за эффективностью лечения сифилиса.
3, клиническое значение серологического теста на антиген спирохеты сифилиса.
(1), положительный указывает: ① текущую инфекцию; ② предыдущую инфекцию.
(2), инфицированный сифилисом, антитело к спирохете сифилиса положительное на всю жизнь, поэтому не может быть использовано в качестве показателя для оценки эффективности лечения.
(3), может быть использован в качестве подтверждающего теста для серологических тестов на антигены спирохет несифилиса (таких как RPR и т.д.) для первичных положительных образцов.
4.Серологическая диагностика инфекции сифилиса.
Несифилис спирохет антиген серологический тест (например, RPR и т.д.) первичный скрининг положительных образцов необходимо подтвердить тест сифилис спирохет антиген серологический тест, чтобы исключить биологические ложные положительные; сифилис спирохет антиген серологический тест положительные результаты, если вам нужно определить, является ли текущая инфекция, или предыдущая инфекция или рецидив, реинфекция, или анти-сифилис оценка эффективности нужно не-сифилис спирохет антиген серологический тест (например, RPR и т.д.), чтобы помочь.