Мутации в кальретикулине и миелопролиферативные новообразования

Первичная тромбоцитемия и первичный миелофиброз являются распространенными типами миелопролиферативных новообразований (МПН). Мутационная активация Янус-киназы 2 (JAK2) ассоциирована с 50-60% случаев МПН; основная причина примерно 30% случаев МПН остается неизвестной. Недавно в одном из исследований было заявлено, что мутации в кальретикулине (CALR) встречаются у большинства больных MPN с инактивацией JAK2 (JAK2-болезнь). В этом исследовании ученые выполнили полноэкзомное секвенирование совпадающих образцов от шести пациентов с первичным миелофиброзом и обнаружили, что мутации CALR присутствуют во всех образцах опухоли. В двух образцах была обнаружена делеция экзона 9 (делеция длиной 52 п.н., классифицируемая как мутация 1-го типа), а в четырех образцах — вставка длиной 5 п.н. в экзоне 9 (мутация 2-го типа). Кроме того, у пациентов с CALR-мутацией, включая пациентов из дополнительной когорты, в 88% случаев JAK2-МПН были обнаружены как JAK2-, так и CALR-мутации. В целом исследователи выявили 36 различных мутаций CALR (в основном мутации 1 и 2 типа), все они привели к сдвигу кода альтернативной рамки считывания 1, которая, по прогнозам, способна изменять карбокси-концевой структурный домен. Мутации 1 типа в значительной степени ассоциированы с первичным миелофиброзом, что означает, что эти два типа мутаций могут иметь различные последствия. Эктопическая экспрессия класса мутантных белков 1-го типа обусловливает интерлейкин-3 (IL-3) в сторону клеточно-независимого роста, что, по-видимому, является результатом активации JAK-сигнального сенсора и катализатора транскрипции 5 (STAT5) сигнализации. В целом авторы обследовали 1215 пациентов с первичной тромбоцитемией или первичным миелофиброзом, 23,5% из них имели мутации CALR, причем у пациентов с CALR+ заболеванием общая выживаемость была выше, чем у пациентов с JAK2+ заболеванием. Кроме того, исследователи провели полноэкзомное секвенирование еще 151 образца MPN и обнаружили инсерции и делеции экзона 9 CALR у 26 из 31 пациента с JAK2-первичной тромбоцитемией или первичным миелофиброзом; аналогичные результаты были получены и в более крупной популяции. образцах миелофиброза встречались наиболее часто. Интересно, что эти результаты свидетельствуют о том, что CALR+ первичная тромбоцитемия имеет более высокую частоту трансформации в миелофиброз по сравнению с JAK2+ заболеванием. Дополнительные анализы также показали, что мутация CALR происходит в отделе гемопоэтических стволовых клеток и является ранним событием у пяти пациентов, прошедших эксперимент, что означает, что она может быть драйверной мутацией. Исследователи выявили 19 различных мутаций CALR и предсказали, что каждая мутация затрагивает карбокси-концевой структурный домен. Было предсказано, что эти мутации приводят к делеции мотива KDEL, который способен локализоваться в эндоплазматическом ретикулуме, и варьируют кислотность этого структурного домена. Однако эктопическая экспрессия мутаций CALR первого и второго типов в клетках HEK293T показала, что на субклеточную локализацию CALR эти мутации не влияют, поэтому необходимы дальнейшие исследования, чтобы определить, почему мутации CALR первого и второго типов являются онкогенными. Таким образом, эти работы пополнили список потенциальных причин изменений в MPN. Будет интересно выяснить, оказывают ли эти изменения какое-либо влияние на лечение. Ген CALR может стать новым молекулярным маркером МПН Исследование LBA-1: наиболее распространенным генетическим изменением при миелопролиферативных новообразованиях (МПН) является мутация JAK2 V617F, которая встречается в 95% случаев истинного эритроцитоза (PV) и в 50%-60% случаев первичной тромбоцитемии (ET) или первичного миелофиброза (PMF). мутации в экзоне 12 гена JAK2 и мутации гена рецептора тромбоцитов (MPL) наблюдаются еще у 5-10% пациентов. Специфические молекулярные маркеры для примерно 40% пациентов с диким типом JAK2 и MPL ЭТ и ПМФ отсутствуют. Клампфл Торстен, доктор медицины, доктор философии, сотрудник Центра молекулярной медицины Австрийской академии наук, применил секвенирование целых экзонов генов для выявления воспроизводимых инсерций и делеций гена CALR, кодирующего белок кальретикулин, у пациентов с ПМФ, имеющих JAK2 и MPL дикого типа. Затем исследователи обследовали 1107 больных MPN на наличие инсерционных и/или делеционных мутаций в экзоне 9 гена CALR; у больных PV мутации не были обнаружены, а мутации CALR встречались у всех больных ET (67%) и PMF (88%) с диким типом JAK2 и MPL. Кроме того, исследователи не обнаружили мутации экзона 9 CALR в 254 первичных острых миелоидных лейкозах (ОМЛ), 45 хронических миелоидных лейкозах (ХМЛ), 73 миелодиспластических синдромах (МДС) и 64 хронических грануломоноцитарных лейкозах. Пациенты с ЭТ и ПМФ с мутациями CALR, как правило, имели более низкое количество лейкоцитов и более высокое количество тромбоцитов, чем пациенты с мутациями JAK2. Независимо от ЭТ или ПМФ у пациентов с мутациями CALR общая выживаемость (ОВ) была лучше, чем у пациентов с мутациями JAK2. У больных ЭТ с мутациями CALR частота тромбозов была ниже, чем у больных с мутациями JAK2. Таким образом, мутации CALR являются специфическими молекулярными маркерами для пациентов с JAK2- и MPL-мутациями-негативными MPN, и их клиническое применение позволит улучшить диагностику заболевания и обосновать выбор терапии. Исследование LBA-2: Исследователи из UK Cancer Genome Project использовали экзомное/геномное секвенирование для оценки статуса гена CALR в 3412 образцах, а экзомное секвенирование 151 образца от больных MPN показало, что большинство (26/31) больных MPN без JAK2- и MPL-мутаций имели соматические мутации в CALR. В то время как мутации CALR и JAK2 и MPL не могли сосуществовать, у 97% пациентов присутствовала только одна из этих трех мутаций. В последующем расширенном исследовании (1345 пациентов с гематологическими злокачественными опухолями, 1517 пациентов с другими опухолями и 550 нормальных контрольных групп) было установлено, что мутации CALR присутствуют у 71% пациентов с ЭТ, 56% пациентов с ПМФ, 86% пациентов с миелофиброзом после ЭТ и 8% пациентов с МДС, тогда как при других миелоидных, лимфоидных или солидных опухолях мутации CALR были отрицательными. Мутации CALR были также обнаружены в высокоочищенных гемопоэтических стволовых/прогениторных клетках от пяти пациентов с MPN, и, таким образом, эта мутация может быть ведущей мутацией, вызывающей данное заболевание. Комментарий MPN относится к группе распространенных гематологических заболеваний, частота которых растет с каждым годом, а возраст начала заболевания прогрессивно уменьшается, что делает актуальным совершенствование диагностики и индивидуализации лечения этих заболеваний. Однако по сравнению с другими гематологическими злокачественными новообразованиями успехи в исследованиях в этой области в последние годы были не столь значительными. За исключением мутаций JAK2 и MPL, которые стали важными молекулярными маркерами и улучшили диагностику некоторых MPN, специфические молекулярные маркеры не были найдены почти для половины ЭТ и ПМФ. Результаты этих двух исследований были весьма новаторскими и вызвали большой интерес со стороны участвовавших в них экспертов. Секвенирование выявило соматическую мутацию в молекулярном шапероне эндоплазматического ретикулума CALR у большинства пациентов с МПН дикого типа JAK2. Кальретикулин является основным кальций-связывающим белком эндоплазматического ретикулума и участвует в регуляции апоптоза, адгезии, иммунитета и других процессов, способствуя правильному сворачиванию белков и поддержанию клеточного гомеостаза кальция. Мутации в CALR приводят к образованию нового С-конца белка, что приводит к изменению его функции. В трансфицированных клеточных линиях снижается агрегация кальретикулина на уровне Гольджи или клеточной поверхности. Эти результаты дают новые идеи для разгадки патогенеза МПН у пациентов с JAK2-мутацией, и необходимы дополнительные исследования для подтверждения роли и значения мутаций CALR в патогенезе МПН. Кроме того, исследования подтвердили, что мутации CALR встречаются в основном при JAK2- и MPL-мутациях-негативных MPN. Ожидается, что мутации CALR будут способствовать дальнейшему улучшению диагностики MPN, а благодаря их особой клинической значимости они могут стать важной основой для индивидуализации лечения MPN и последующих целевых терапевтических исследований. Мутации в кальретикулине и миелопролиферативные новообразования Первичная тромбоцитемия и первичный миелофиброз — распространенные типы миелопролиферативных новообразований (МПН) Мутационная активация Янус-киназы 2 (JAK2) связана с 50-60% случаев МПН; основная причина примерно 30% случаев МПН остается неизвестной. В настоящее время в двух работах сообщается, что мутации в кальретикулине (CALR) встречаются у большинства пациентов с МПН с инактивацией JAK2 (JAK2-болезнь). Klampfl et al. провели полноэкзомное секвенирование совпадающих образцов от шести пациентов с первичным миелофиброзом и, в свою очередь, обнаружили, что мутации CALR присутствуют во всех образцах опухоли. В двух образцах была обнаружена делеция экзона 9 (делеция длиной 52 п.н., классифицируемая как мутация 1-го типа), а в четырех образцах — вставка длиной 5 п.н. в экзоне 9 (мутации 2-го типа). Кроме того, у пациентов с мутацией CALR, включая пациентов из дополнительной когорты, в 88% случаев JAK2-МПН были обнаружены как JAK2-, так и CALR-мутации. В целом Klampfl et al. идентифицировали 36 различных мутаций CALR (в основном мутации 1 и 2 типа), все они привели к сдвигу кода альтернативной рамки считывания 1, которая, по прогнозам, способна изменять карбокси-концевой структурный домен. Мутации 1 типа в значительной степени ассоциированы с первичным миелофиброзом, что означает, что эти два типа мутаций могут иметь различные эффекты. Эктопическая экспрессия класса мутантных белков 1-го типа обусловливает интерлейкин-3 (IL-3) в сторону клеточно-независимого роста, что, по-видимому, является результатом активации JAK-сигнального сенсора и катализатора транскрипции 5 (STAT5) сигнализации. В целом авторы исследовали 1215 пациентов с первичной тромбоцитемией или первичным миелофиброзом; 23,5% из них имели мутации CALR, и у пациентов с CALR+ заболеванием общая выживаемость была выше, чем у пациентов с JAK2+ заболеванием. В другой работе Nangalia et al. провели полноэкзомное секвенирование 151 образца MPN и обнаружили инсерции и делеции экзона 9 CALR у 26 из 31 пациента с JAK2-первичной тромбоцитемией или первичным миелофиброзом; аналогичные результаты были получены в более крупной популяции. Наиболее распространенными были мутации 1 и 2 типа, причем мутации 1 типа вновь были обнаружены у пациентов с первичным миелофиброзом. Мутации 1-го типа, в свою очередь, были наиболее распространены в образцах первичного миелофиброза. Интересно, что авторы обнаружили, что CALR+ первичная тромбоцитемия имеет более высокую частоту трансформации в миелофиброз по сравнению с JAK2+ заболеванием. Дополнительный анализ также показал, что мутация CALR происходит в отделе гемопоэтических стволовых клеток и является ранним событием у пяти пациентов, подвергшихся эксперименту, что позволяет предположить, что она может быть драйверной мутацией. Nangalia et al. идентифицировали 19 различных мутаций CALR и предсказали, что каждая мутация затрагивает карбокси-концевой структурный домен. Было предсказано, что эти мутации приводят к делеции мотива KDEL, который способен локализоваться в эндоплазматическом ретикулуме и варьировать кислотность этого структурного домена. Однако эктопическая экспрессия мутаций CALR первого и второго типов в клетках HEK 293T показала, что на субклеточную локализацию CALR эти мутации не влияют, поэтому необходимы дальнейшие исследования, чтобы определить, почему мутации CALR первого и второго типов являются онкогенными. Таким образом, эти работы пополнили список потенциальных причин изменений в MPN. Будет интересно выяснить, оказывают ли эти изменения какое-либо влияние на лечение