В настоящее время, согласно критериям классификации лейкоза Всемирной организации здравоохранения, для постановки более точного диагноза и классификации, более точного выбора методов лечения, определения интенсивности и продолжительности лечения, суждения об эффективности и оценки будущего результата (прогноза) лечения необходимы цитоморфологические (М), иммунологические (И), генетические (С) и молекулярно-биологические (М) методы анализа.
Морфологический анализ — это наблюдение специалистом под микроскопом морфологии и структуры костного мозга и клеток крови или ткани костного мозга. Морфологические методы просты, быстры и экономичны, они являются самым основным методом диагностики злокачественных заболеваний крови и широко используются в больницах. В большинстве случаев врачи в основном берут небольшое количество суспензии клеток костного мозга для наблюдения за морфологией клеток, а затем проводят цитохимическое окрашивание. Иногда, чтобы понять структуру различных тканей костного мозга, долю кроветворной ткани, а также для наблюдения за некоторыми клетками, которые трудно извлечь, врач берет небольшие кусочки ткани костного мозга (называемые биопсией) для патологоанатомического исследования. Морфологические методы позволяют диагностировать более 90% острых лейкозов, а для хронических лейкозов можно сделать некоторые предварительные оценки. Диагноз острого лейкоза определяется в основном пропорцией примитивных клеток ко всем ядросодержащим клеткам, поэтому некоторые ранние острые лейкозы могут быть пропущены, если диагноз острого лейкоза основывается только на этом критерии. Морфологические методы менее точны для типирования острого лейкоза. Сообщалось, что семь ведущих морфологов-гематологов из Франции, Великобритании и США (FAB) типировали одни и те же образцы острого лейкоза и согласились с типированием только около 70% образцов, что означает, что около 30% случаев было трудно правильно типировать с помощью морфологического анализа. Ошибка еще больше, если специалист является общим морфологическим аналитиком. Более того, трудно точно диагностировать и типировать хронический лейкоз, используя только морфологический анализ.
Метод иммунологического анализа в основном использует несколько моноклональных антител для маркировки антигенов клеток, затем проточную цитометрию для обнаружения нескольких маркеров на поверхности клеток или внутри клеток и сохранения данных в компьютере, и, наконец, анализ этих данных с помощью некоторых программ анализа для классификации клеток по группам. Благодаря использованию иммунологического анализа поверх морфологического анализа клеток, точность типирования при остром лейкозе может достигать более 90%. Можно точно определить, происходят ли злокачественные клетки от Т- и В-лимфоцитов, миелоидных клеток, а также отличить острый лейкоз от хронического лейкоза. Иммунологический анализ играет ключевую роль в диагностике некоторых заболеваний хронического лимфоцитарного ряда и их стадировании. Морфологически трудно отличить хронический лимфоцитарный лейкоз и некоторые низкосортные злокачественные лимфомы от доброкачественного лимфоцитоза, такого как вирусные инфекции, тогда как иммунологический анализ может лучше дифференцировать, являются ли клетки доброкачественными или злокачественными.
Иммунологический анализ также может обнаружить очень небольшое количество злокачественных клеток (также известных как микроскопические остаточные поражения), и если есть одна злокачественная клетка из 10 000, она может быть обнаружена с помощью проточной цитометрии. Поскольку большинство лейкозных клеток имеют некоторые аномальные иммунологические маркеры, этот метод может быть использован для обнаружения остаточных лейкозных клеток у большинства пациентов.
Генетические методы используются для выяснения наличия у злокачественных клеток хромосомных аномалий путем анализа кариотипа клеток миелоидного лейкоза или обнаружения определенных участков хромосом с помощью зондов. Хромосомный анализ пациентов все больше ценится клиницистами и исследователями за его независимую диагностическую ценность, ценность в помощи при выборе лечения и ценность в прогнозировании эффективности лечения. Например, для постановки диагноза хронического миелоидного лейкоза необходимо наличие t(9;22) или аномалий с участием хромосомы 22, или наличие этих аномалий, образующих слияние генов bcr/abl, иначе диагноз не может быть поставлен. Если у пациента имеются некоторые хромосомные аномалии, характерные для острого лейкоза, такие как t(8;21), t(15;17) и inv(16), ранний диагноз острого лейкоза может быть поставлен, даже если примитивные клетки не соответствуют критериям острого лейкоза. Тогда, например, острый промиелоцитарный лейкоз с хромосомными аномалиями t(15;17) хорошо лечится винкристином и мышьяком, а пациенты с хромосомными аномалиями t(8;21), inv(16) хорошо переносят цитарабин в высоких дозах и могут лечиться без предварительной трансплантации; в то время как острый лимфобластный лейкоз с хромосомными аномалиями t(9;22), пациенты со сложными хромосомными аномалиями, -5, и -7 и другими хромосомными аномалиями очень неэффективны при химиотерапии и должны как можно скорее пройти лечение трансплантацией гемопоэтических стволовых клеток. Поэтому последние протоколы ВОЗ по типированию злокачественных гематологических заболеваний отводят хромосомным и/или генетическим аномалиям очень важное место. Методы генетического анализа являются наиболее специфичными тестами, и после обнаружения клонально аномальной хромосомы существует высокая степень уверенности в том, что клетка имеет аномалию. Однако у многих злокачественных клеток невозможно обнаружить аномальные хромосомы.
Молекулярно-биологический анализ может выявить наличие или отсутствие генетических аномалий в клетках лейкемии. Как и в случае генетических методов, молекулярно-биологическое типирование имеет самостоятельное диагностическое и прогностическое значение. Некоторые хромосомные аномалии могут давать начало генам, специфичным для лейкемических клеток, поэтому можно реагировать на хромосомные аномалии путем выявления этих специфичных для лейкемии генов, например, транслокации t(9;22), которые дают начало генам слияния bcr/abl, транслокации t(15;17), которые дают начало генам слияния PML/RARα, и аномалии t(8;21), которые дают начало генам слияния AML1/ETO. Более того, иногда лейкозные клетки хромосомно нормальны, а молекулярно-биологический анализ может выявить некоторые аномальные или мутировавшие гены, такие как FLT3, WT1, NPM и др. Эти генетические аномалии могут помочь выбрать лечение и судить о его эффекте и будущем развитии. Молекулярно-биологический анализ является наиболее чувствительным методом, обнаруживая одну аномальную клетку на каждые 100 000 клеток, но его специфичность не так высока, как у генетического анализа. Кроме того, каждый аномальный ген должен быть изучен и проанализирован на предмет последовательности генов, прежде чем будет разработан клинический рутинный тест.
В заключение, каждый из вышеперечисленных методов имеет свои преимущества и недостатки, и каждый метод может отражать характеристики клеток с разных сторон, которые могут быть интегрированы для более полного отражения характеристик клеток и лучшей помощи в выборе лечения, оценке прогноза и эффективности лечения.