С 1985 года, когда в США был утвержден первый тест на антитела к ВИЧ, технология тестирования на антитела к ВИЧ обновлялась с быстрым развитием иммунологии и молекулярно-биологических методов. Согласно «Национальной технической спецификации тестирования на ВИЧ», изданной Министерством здравоохранения в 2004 году, тестирование на антитела к ВИЧ делится на три этапа: первичный скрининг, повторное тестирование и подтверждающее тестирование.
1.Первичный скрининг и повторное тестирование.
В основном это ферментный иммуносорбентный анализ, тест быстрого обнаружения, иммуноферментный анализ с хемилюминесценцией, метод иммуноферментного анализа с флуоресценцией с временным разрешением и неинвазивный тест на антитела к ВИЧ.
1.1 Ферментный иммуносорбентный анализ (ELISA).
Реагенты для ELISA на антитела к ВИЧ прошли через четыре поколения.
В 1985 году, первое поколение непрямого ИФА, лизат вируса ВИЧ в качестве антигена оболочки, чувствительность и специфичность не высоки, период окна около 3 месяцев; 1990 год, второе поколение непрямого ИФА, генно-инженерный рекомбинантный или синтетический пептид в качестве антигена оболочки, может обнаружить ВИЧ-1 и ВИЧ-2 одновременно, специфичность значительно улучшилась по сравнению с первым поколением, период окна был сокращен примерно на 20 дней; 1994 год, третье поколение сэндвич-метода двойного антигена Сэндвич-метод двойного антигена третьего поколения, такой же, как и второе поколение, но с новым пептидом gp41, может выявлять различные подклассы антител к ВИЧ, включая IgG, IgM, IgA и др. , чувствительность и специфичность выше, период окна сокращен до 3-4 недель, является текущей основной продукцией; 1998, 4-е поколение, антиген ВИЧ и анти-p24 антитело, покрытое твердофазным носителем, может обнаружить антитело ВИЧ и антиген p24 в то же время, чувствительность еще более улучшена, «период окна сокращен примерно до 20 дней. Чувствительность улучшается, «период окна» сокращается на 4-8 дней, но существует «второй период окна», который в настоящее время используется для вспомогательной диагностики.
1.2 Экспресс-тест (RT).
Включает иммуноспот-тест, иммунохроматографический тест, тест агглютинации желатиновых частиц. Метод прост: не требуется специального оборудования, быстр: результаты теста могут быть получены в течение 30 минут, особенно для экстренного тестирования, дозорных пунктов эпиднадзора за ВИЧ, поселковых центров здоровья, общественных медицинских пунктов и т.д.
1.3 Хемилюминесцентный иммуноанализ.
Микрочастица, микропланшетная технология хемилюминесцентного иммуноанализа для обнаружения антител к ВИЧ, с более высокой чувствительностью, чем ИФА. Электрохимический хемилюминесцентный иммуносенсор, созданный из мезопористых материалов, нагруженных квантовыми точками и инкапсулированных нанозолотом, позволяет обнаруживать антитела к ВИЧ с высокой селективностью и чувствительностью.
1.4 Метод иммунофлуоресцентного анализа с временным разрешением.
Применение двойного антигенного сэндвича в сочетании с иммунофлуоресцентным анализом с временным разрешением (антиген ВИЧ, меченный европием) значительно повысило чувствительность и специфичность. Чувствительность набора составляет 100%, специфичность — 98,9%, а точность — 99,4%.
1.5. Неинвазивный тест на антитела к ВИЧ.
В дополнение к анализу крови, анализ слюны и мочи стал новым способом тестирования на ВИЧ, который имеет больше преимуществ с точки зрения безопасности и удобства.
2. Подтверждающий тест.
Положительные образцы для скрининга на антитела к ВИЧ необходимо подтвердить тестом, в основном иммуноблот тестом, полосовым иммуноблот тестом, также включает радиоиммунопреципитационный тест и тест иммунофлуоресценции и т.д.
2.1 Иммуноблот тест (ВБ).
ВБ в настоящее время является наиболее часто используемым методом подтверждения положительного результата на ВИЧ в Китае, а сочетание ИФА + ВБ является признанным золотым стандартом для диагностики ВИЧ. Основной принцип заключается в электрофорезе антигена цельного вируса ВИЧ с помощью SDS-PAGE и последующем электропереносе на мембрану NC; добавление тестируемой сыворотки, затем добавление меченного ферментом античеловеческого IgG и субстрата для получения полосы в соответствующей позиции мембраны, которую можно различить невооруженным глазом.
2.2 Анализ полосового иммуноблоттинга (LIA).
LIA — это модификация метода ВБ, использующая генно-инженерный рекомбинантный белок или химически синтезированный пептид для замены антигена вирусного лизата, используемого в методе ВБ в качестве антигена диагностического реагента.