В иммуноферментном анализе, или сокращенно ИФА, антитела связываются с ферментными комплексами, которые затем определяются по цвету. Этапы: ИФА выявляется с помощью сыворотки, сначала кровь должна агглютинироваться не менее получаса, затем сыворотку берут для разведения ферментного комплекса с разбавителем, добавляют сыворотку и отрицательный и положительный контроль, а также контроль качества. После часа инкубации пластину промывают, добавляют субстрат, завершают реакцию добавлением раствора для прекращения реакции после получаса светонепроницаемой реакции, а затем считывают показания. Полученное значение используется для определения отрицательного или положительного результата.
Классификация
Серологический тест > Серологический тест на вирусы
Принцип измерения
ИФА: носитель, инкапсулированный с инактивированным антигеном вируса краснухи, может связываться со специфическими антителами в тестируемом образце, и соответствующее антитело обнаруживается с помощью меченного ферментом античеловеческого иммуноглобулина и субстрата.
Реагенты
Те же, что и для общего ИФА, за исключением инактивированного антигена вируса краснухи, покрытого микротитровальным планшетом, и отрицательной и положительной контрольных сывороток.
Метод работы
1. Сбор образцов, для скринингового теста необходимо взять только один образец крови, но если необходимо определить иммунный статус инфицированного человека, образцы должны быть взяты у пациентов с подозрением на краснуху в течение 3 дней после появления сыпи и в последующие 14-21 день для одновременного тестирования.
2, как и в общем ИФА, добавьте 50 мкл PBS в каждую лунку контроля и образца, затем 10 мкл образца, выдержите при 25°C в течение 45 минут, промойте и аспирируйте.
3. Добавьте 250 мкл ферментного маркера в каждую лунку, подогрейте и промойте таким же образом.
4. Добавить 250 мкл раствора субстрата pNPP, выдержать и промыть таким же образом, затем добавить 50 мкл 1 ммоль/л гидроксида натрия для прекращения реакции, измерить значение абсорбции в каждой лунке при 405 нм и судить о результате тестирования образца.
5.Если результат положительный, образец может быть дополнительно разведен для определения титра антител, сравнить результаты двух последовательных образцов и вынести заключение
Определение
1, антитела IgG и lgM к вирусу краснухи положительны, или титр антител IgG ≥ 1: 512, что указывает на недавнее заражение вирусом краснухи.
2, Антитела IgG и IgM к вирусу краснухи отрицательные, что указывает на отсутствие предыдущей инфекции вирусом краснухи.
3, титр антител lgG к вирусу краснухи <1_512 и антитела lgM отрицательные, что указывает на предыдущее инфицирование. 4, Кроме того, повторное инфицирование вирусом краснухи нелегко обнаружить, поскольку появляются только преходящие антитела IgM или появляются на очень низком уровне. Поэтому титр антител IgG к вирусу краснухи, повышенный более чем в 4 раза в двойной сыворотке, является показателем недавней инфекции вирусом краснухи, независимо от того, положительны ли антитела lgM. Клиническое значение Краснуха, также известная как немецкая корь, имеет пик заболеваемости весной и в начале лета. Частота положительных антител к вирусу краснухи увеличивается с возрастом, а новорожденные могут приобретать антитела IgG к вирусу краснухи через своих матерей, которые были инфицированы вирусом ранее в жизни. Антитела lgM вырабатываются примерно через 4 дня после появления сыпи, достигают пика примерно через 10 дней и сохраняются 6-12 недель или иногда до года; антитела IgG появляются немного позже, чем антитела lgM, и постепенно увеличиваются, достигая пика через 1-2 месяца. Антитела IgG появляются немного позже, чем антитела lgM, и постепенно нарастают, достигая пика в 1 - 2 месяца, а затем снижаются, в основном на всю жизнь. 80% населения положительны на эти антитела. Измерение Нормальный диапазон: Отрицательные антитела против вируса краснухи IgM, отрицательные антитела против вируса краснухи IgG. Описание теста: Антитела против вируса краснухи IgM в основном используются для диагностики острой инфекции вируса краснухи, а антитела против вируса краснухи Ig обычно появляются в сыворотке крови через 2 недели после инфицирования. Клиническое значение: Положительный: Инфекция вирусом краснухи.