VDAC2, перспективный иммуногенный мембранный антиген при раке поджелудочной железы

   Аннотация】 Цель: провести скрининг и выявить иммуногенные мембранные антигены, ассоциированные с раком поджелудочной железы, используя протеомные методы.  Методы: Мембранные белки клеточной линии рака поджелудочной железы SW1990 были культивированы, выделены и очищены, мембранные белки были разделены двумерным двунаправленным гель-электрофорезом (2DE), параллельные гели 2DE были окрашены Komas Brilliant Blue и иммуноблот гибридизацией, соответственно. IgG были собраны и очищены из сывороток 66 клинических пациентов с раком поджелудочной железы и 24 пациентов с хроническим панкреатитом, и была проведена иммуноблот-гибридизация с параллельными гелями мембранного белка 2-DE, соответственно. Гибридизационно-положительные участки белков были идентифицированы с помощью матрично-ассистированной лазерной десорбционной ионизации с времяпролетным масс-спектрометрическим анализом с библиотекой пептидных масс-отпечатков. RT-PCR, количественная флуоресцентная ПЦР в реальном времени и Вестерн-блот применялись для проверки достоверности проверенных мембранных антигенов на уровне генов и белков в клеточных линиях и тканях соответственно, а также для сравнения различий в уровнях экспрессии генов и белков целевых мембранных антигенов в различных клеточных линиях рака поджелудочной железы и нормальных тканях поджелудочной железы. Результаты При иммуноблот гибридизации мембранного белка клеточной линии рака поджелудочной железы SW1990 с IgG сыворотки крови пациентов с раком поджелудочной железы было обнаружено в общей сложности 9 положительных пятен, которые не дублировали 2 положительных пятна, обнаруженных при гибридизации IgG при хроническом панкреатите. Ген кандидатного мембранного антигена VDAC2 экспрессировался в клетках клеточных линий рака поджелудочной железы SW1990, AsPc и P3, что было продемонстрировано с помощью RT-PCR и Real time-PCR. Результаты вестерн-блоттинга показали, что экспрессия белка кандидатного мембранного антигена VDAC2 была значительно выше в клеточных линиях рака поджелудочной железы, чем в нормальной ткани поджелудочной железы.  Заключение: VDAC2 может быть иммуногенным мембранным антигеном, ассоциированным с раком поджелудочной железы, его ген был экспрессирован в клеточных линиях рака поджелудочной железы SW1990, AsPc и P3, а уровень экспрессии белка был значительно выше в клеточных линиях рака поджелудочной железы, чем в нормальных тканях поджелудочной железы.